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Biozellen細胞系3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)膠
一、產(chǎn)品說明
貨號:B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10
規(guī)格:2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit
保存條件:4℃保存、 保存兩年
二、產(chǎn)品描述
Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝包含整套膠體與試劑,可3D細胞培養(yǎng)與微環(huán)境應用等;本試劑盒操作便利且可調(diào)控基質(zhì)膠硬度進行多種細胞培養(yǎng)測試;高分子膠體可快速形成水凝膠, 建議操作此培養(yǎng)膠體前詳讀此使用指南。
(Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝為植物來源,無動物成分)
三、產(chǎn)品應用
•三維細胞球體培養(yǎng)試驗
•適合用于三維細胞藥物篩檢平臺
四、樣本類型
•腫瘤細胞系
五、Biozellen細胞系3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)膠試劑盒成分
六、使用步驟
A、試劑制備
A基質(zhì)膠:將A基質(zhì)膠溶于37℃水浴槽回溫10分鐘, 確認*融解.
C緩沖溶液(1X)制備:使用前將10X C緩沖溶液用冰的無細胞培養(yǎng)液(例如: 無血清DMEM、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .
D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.
B、Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)膠的制備
全部步驟需要在無菌環(huán)境內(nèi)操作,操作步驟如下:
1. 將24孔培養(yǎng)板放置于冰上預冷。
2. 細胞計數(shù)后取 2×105~2×107 細胞與 0.5 毫升 37℃ 培養(yǎng)基均勻混合,并與0.5毫升37℃ A膠按照 1:1 等比例均勻混合,最終細胞密度105~107cells/mL。
注:請選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)溶液與條件進行試驗,貼壁細胞應在~80% 匯合度下培養(yǎng)。
3.取 20-40 微升步驟 2 含細胞的混合 A 膠溶液滴于 步驟 1 預冷的培養(yǎng)板上,膠體將于 5 分鐘內(nèi)成膠。 注: 測試膠體是否成膠,可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認。
4.待膠體成膠后,添加1毫升冰的1X C緩沖溶液,并蓋過步驟3 的膠溶液,固定 15 分鐘。
5.待15分鐘固定后,小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長之培養(yǎng)基溶液。
6將含有細胞的膠于37°C 二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進行7~14天的培養(yǎng),并觀察細胞球體的形成,按正常培養(yǎng)基更換頻率進行更換操作。
C、溶膠與收集細胞球體準備程序
小心的將培養(yǎng)基吸取移除,并用1X PBS進行清洗。
小心的將 1X PBS 吸取移除,并添加 1 毫升冰的D緩沖溶液,蓋過膠滴于室溫反應 5分鐘。
溫和的用1毫升移液管吸取,直到膠滴*溶解。
將含有細胞球體的溶液吸入1.5 毫升離心管,用1000 rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘,移除上清液體并收集細胞球體做分析。
D、收集單顆細胞準備程序
在分離單細胞前,先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進行操作
1. 添加trypsin-EDTA并與收集的細胞球體于37°C混合反應。
2. 用1毫升移液管混合,直到細胞體*分解。
3. 待細胞球體*分解,加入3倍體積的1X PBS,并用1000轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速進行離心10分鐘,并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析。
七、案例分享
A.形成3D腫瘤球體成功案例分享
B.Biozellen基質(zhì)膠被溶解后分離的完整3D細胞結(jié)構(gòu)照片
培養(yǎng)后的3D細胞球體, 在Biozellen基質(zhì)膠被試劑盒里面的
D Buffer溶解分離后仍然可以得到完整的3D細胞結(jié)構(gòu)
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