一、H9C2大鼠心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品說(shuō)明：

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包裝規(guī)格

貨號(hào)：AD600025 、AD600050、AD600075、AD600150

規(guī)格：0.25ml、0.5ml、0.75ml、1.5ml

3、儲(chǔ)存條件

常溫運(yùn)輸，4℃保存，可保存兩年，拒絕反復(fù)凍融。

二、H9C2大鼠心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效果

轉(zhuǎn)染條件

培養(yǎng)板：24孔板

轉(zhuǎn)染試劑用量：2ul

轉(zhuǎn)染試劑：Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時(shí)間：24小時(shí)

血清：Z7180FBS-500超低內(nèi)毒素胎牛血清

細(xì)胞凍存：CE70100T無(wú)血清細(xì)胞凍存液

三、使用說(shuō)明：

1、材料準(zhǔn)備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水；②無(wú)內(nèi)毒素 ）

2、操作步驟

提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中不用換液。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。

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