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表達(dá)融合蛋白時，如何把兩個基因拼接起來？2021/8/26
A君：我要表達(dá)一個ras加GFP融合蛋白，怎么設(shè)計引物？安培君：你的GFP標(biāo)簽蛋白在載體里還是要你自己插進(jìn)去？A君：是我自己插進(jìn)去。安培君：你打算怎樣融合？A君：是不是這樣？酶切A基因，酶切質(zhì)粒，把A...
教你如何做分子構(gòu)建，從此邁向科研達(dá)人！2021/8/25
做過分子實驗的人都知道，要想做的有效率有質(zhì)量是很苦逼的，1個月做100個克隆那都是小case，沒點看家的本事怎么行。如果再遇到比較稀有的基因，周旋個把月，那也是家常便飯。下面就和大家分享一些載體構(gòu)建的...
學(xué)學(xué)序列拼接，想節(jié)省費(fèi)用的千萬別錯過！2021/8/25
相信大家PCR之后一般要進(jìn)行測序以保證擴(kuò)增序列的正確性吧？由于測序能力的限制，目前好的公司也只能保證一個反應(yīng)800bp測準(zhǔn)。如果大家的克隆片斷大于1k，那么勢必要同時測兩個反應(yīng)，然后將兩個反應(yīng)得到的序...
你真的了解 TA 克隆嗎？2021/8/25
首先，TA克隆是用于PCR產(chǎn)物的克隆和測序。原理是利用Taq酶能夠在PCR產(chǎn)物的3’末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3’T突出端的載體，在連接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR產(chǎn)物...
上圖！教你秒懂重組 DNA 技術(shù)常用工具酶！2021/8/25
1分子剪刀——限制性內(nèi)切酶：作用：識別特異序列，切割DNA限制酶的命名是根據(jù)細(xì)菌種類而定，以EcoRI為例：2膠水——DNA連接酶作用：跟限制性內(nèi)切酶對著干，催化DNA中相鄰核苷酸間形成磷酸二酯鍵，使...
如何解決酶切切過頭的問題？2021/8/25
之前談到了酶切切不動的問題。這一次，我們探討一下酶切的另外一端：酶切切過頭的問題。還是按照一貫的做法和思路，發(fā)現(xiàn)主要是兩個原因?qū)е碌?，解決辦法也是有的。一、酶切時間過長酶切時間過長的確有時候會對目的條...
【技術(shù)】酶切、酶切，切還是不切？2021/8/24
酶切，作為一種常用的分子克隆的手段，如果應(yīng)用得當(dāng)，可謂寶刀屠龍，無往而不利；如果應(yīng)用不當(dāng)，又會步步維艱。真是讓人歡喜讓人憂愁。酶切，最常見的問題就是切不動和切過了。這些問題比較復(fù)雜。下面，先講一講切不...
瓊脂糖凝膠電泳、酶和試劑的使用等一些注意事項2021/8/24
基因克隆在發(fā)明后的32年，需求一直不斷增加，但是有些小伙伴的重組質(zhì)粒就是怎么樣都構(gòu)建不出來。其實，看似簡單的傳統(tǒng)基因克隆，可是存在著重重陷阱！美國羅林斯研究中心（RollinsResearchCent...
DNA載體構(gòu)建——【干貨】三圖讓你秒懂質(zhì)粒圖譜2021/8/24
很多人拿到一個質(zhì)粒圖譜，第一反應(yīng)只能是仰天長嘯，這是什么玩意？這些ori、RBS、tet是什么鬼？這些箭頭代表什么，轉(zhuǎn)錄的方向嗎？為什么都不相同，不會“撞車”么？來，看幾張圖，上面的問題就能一一破解。...
為什么不能用質(zhì)粒DNA抽提試劑來提取基因組DNA？2021/8/24
導(dǎo)讀為什么同樣抽提質(zhì)粒DNA的試劑不能用來抽提基因組DNA呢？差別很大么？要買兩種試劑盒真是麻煩??！你還不要不相信，有小伙伴試過，還真沒抽提出來。今天小編就來和大家一起探究下原因！基因組DNA的抽提，...
【技術(shù)貼】DNA 純化實驗的幾種常用方法2021/8/24
DNA純化是分子生物學(xué)研究中經(jīng)常需要用到的一種方法。一般來說，做DNA純化有3個目的：1.獲得高純度的DNA；2.濃縮DNA；3.用DNA做測序，芯片等生物信息學(xué)方面的實驗。下面，談一談DNA純化的幾...
DNA序列比對——Blast，序列比對界中的先鋒！2021/8/23
NCBI中的Blast被譽(yù)為序列比對界中的先鋒，并非浪得虛名的，它多才多藝（功能多樣），博學(xué)多識（比對面面俱到），還廣交天下名人雅士（可獲得各大數(shù)據(jù)庫的信息）。今天，小編讓大家見識一下老大的風(fēng)采。首先...
干貨貼：NCBI 上的這些字母都是什么意思？2021/8/23
NCBI上基因前面有個accession（編號）分別有NC、NM、NP、GI、XP、XM、BC、AB、NG、AJ、AC、AY和AF等等，然后后面是一串?dāng)?shù)字，都是什么意思？？特別是看Blast結(jié)果時，這...
如何在 NCBI 上進(jìn)行菌種的同源性比對2021/8/23
當(dāng)我們將未知菌株送到公司測序時，并不意味著公司會直接告訴我們未知菌株是什么種什么屬的，他們只會給你未知菌株的測序序列，這時候就需要我們自己在NCBI上進(jìn)行同源性比對。下面結(jié)合實驗經(jīng)歷跟大家交流一下。首...
Thp-1細(xì)胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享2021/8/23
一、轉(zhuǎn)染材料準(zhǔn)備1.轉(zhuǎn)染試劑用量：10ul2.siRNA濃度：20um/L3.細(xì)胞密度：1*106-1*1054.轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板：6孔板5.轉(zhuǎn)染試劑：AdvancedDNARNA轉(zhuǎn)染試劑；貨號：AD60...
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