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細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法2021/11/25
細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變...
關(guān)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，這幾點(diǎn)必須要清楚2021/11/25
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNARNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。可分為瞬時轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染等瞬時轉(zhuǎn)染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細(xì)胞可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)...
90%的人在進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時，幾乎忽略了這6點(diǎn)注意事項(xiàng)！2021/11/25
轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。分為物理介導(dǎo)方法：電穿孔法、顯微注射和基因槍；化學(xué)介導(dǎo)方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法：有較為原始的原...
細(xì)胞轉(zhuǎn)染總是失??？一文教你如何做好細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)2021/11/25
細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。其在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等實(shí)驗(yàn)和應(yīng)用中使用越來越廣泛。然而，轉(zhuǎn)染效率低下卻一直是科研工作者們經(jīng)常遇到的一大難...
細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率低如何破?2021/11/25
細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低如何破?細(xì)胞轉(zhuǎn)染是細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的一種常用的技術(shù)手段。而轉(zhuǎn)染效率低卻是實(shí)驗(yàn)科研者經(jīng)常遇到的問題，尤其是原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染，更是因?yàn)殡y度大，號稱誰碰誰死，而令人談虎色變。不，應(yīng)該是談原代...
如何做核提取物制備優(yōu)化？2021/11/24
材料與儀器轉(zhuǎn)瓶或單層培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞（如HeLa細(xì)胞）高鹽緩沖液分別含0.8、1.0、1.2、1.4及1.6molLKCl貝克曼JS4.2轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子50mL圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的...
核提取物的制備方法2021/11/24
材料與儀器轉(zhuǎn)瓶或單層培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞（如HeLa細(xì)胞）PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1.2molLKCl透析緩沖液液氮貝克曼JS4.2轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子50mL圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物...
如何做非肌肉肌球蛋白的層析純化？2021/11/24
材料與儀器非肌肉肌球蛋白勻漿緩沖液肌動蛋白聚合緩沖液凝膠過濾羥基磷灰石緩沖液GFHT緩沖液大容量轉(zhuǎn)頭步驟高速離心和DEAE層析1.用不含除了PMSF以外的蛋白水解抑制劑的勻漿緩沖液平衡DEAE纖維素，...
細(xì)胞勻漿的操作2021/11/24
材料與儀器細(xì)胞緩沖鹽溶液二異丙基氟瞬酸勻漿緩沖液相差顯微鏡步驟1.準(zhǔn)備下面的貯液和材料。等滲的緩沖鹽溶液（例如PBS，150mmol/LNaCl；10mmol/LNaPO4，pH7.2)二異丙基氟瞬酸...
從培養(yǎng)的細(xì)胞中純化總RNA的方法2021/11/24
材料與儀器細(xì)胞RNA提取緩沖液變性液水飽和酚培養(yǎng)皿Falcon2063管步驟1.取1個細(xì)胞已長滿的100ml培養(yǎng)皿，吸出培養(yǎng)液，加2mlRNA提取緩沖液，用橡膠刮棒刮下細(xì)胞。RNA提取緩沖液：變性液，...
純化質(zhì)粒（堿裂解法）2021/11/18
材料與儀器大腸桿菌LB葡萄糖緩沖液乙酸鉀離心管步驟1.單個大腸桿菌克隆接種到2ml含適當(dāng)抗生素的LB中。37℃劇烈振蕩孵育5~8小時?；蛘呖梢耘囵B(yǎng)過夜使飽和。2.倒1.5ml培養(yǎng)液到已作標(biāo)記的微量離心...
基因組DNA的快速純化方法2021/11/18
材料與儀器尾部緩沖液蛋白酶K離心管玻璃棒步驟第1天1.大約1.5cm長的尾部活檢樣品放在一個1.5ml盛有0.7ml尾部緩沖液的小離心管中，加35ul10mg/ml蛋白酶K，在55℃振搖溫育過夜。尾部...
如何從哺乳動物細(xì)胞或組織分離DNA2021/11/18
材料與儀器細(xì)胞TBS抽提緩沖液離心管步驟1.根據(jù)樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟1進(jìn)行操作。(1)細(xì)胞樣品①單層培養(yǎng)的細(xì)胞以用冰預(yù)冷的TBS將單層細(xì)胞洗滌2次，用刮棒把細(xì)胞刮入約0.5ml的TBS...
如何從組織中分離制備細(xì)胞核基質(zhì)/中間纖維支架結(jié)構(gòu)？2021/11/18
材料與儀器新鮮組織NaCl緩沖液細(xì)胞骨架緩沖液Teflon研杵Doume勻漿器步驟1.在4℃將新鮮組織切成1mm3左右的小塊。在4℃，用Teflon研杵和Doume勻漿器在含0.5%TritronX-...
如何從培養(yǎng)細(xì)胞中制備細(xì)胞核基質(zhì)/中間纖維骨架結(jié)構(gòu)？2021/11/18
材料與儀器細(xì)胞TritronX-100抽提緩沖液電子顯微鏡步驟1.在4℃用PBS洗細(xì)胞一次。2.在4℃用含0.5%TritronX-100的細(xì)胞骨架緩沖液抽提細(xì)胞3到5分鐘。直到消化步驟，每107個細(xì)...
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