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cDNA 5’末端的快速擴(kuò)增（5’-RACE）2021/12/21
原理在分子克隆中沒有比分離缺乏相應(yīng)的mRNA5'末端的序列特征結(jié)構(gòu)的cDNA克隆更易失敗的了。通常存在于cDNA基因文庫中的部分克隆，由于反轉(zhuǎn)錄酶未能沿全長mRNA模板延伸*，合成的cDNA第一條鏈往...
純化的RNA的點雜交和狹線雜交2021/12/21
原理點雜交和狹線雜交技術(shù)（Kafatosetal.1979)用于在同一固相支持物（通常為帶電荷的尼龍膜）上固定幾種核酸樣品，然后用合適的探針與已固定的樣品雜交，并由此判斷靶序列的濃度。通過估計樣品點發(fā)...
從鼠尾或其他小樣本中制備基因組DNA2021/12/20
原理這一簡單的實驗方案在成百上千的實驗室被廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因或基因剔除小鼠的基因型鑒定以及從小量培養(yǎng)的細(xì)胞或組織塊中提取DNA。材料與儀器蛋白酶K培養(yǎng)的細(xì)胞鼠尾或小鼠組織乙醇異丙醇酚氯仿異戊醇磷酸鹽緩沖...
從96孔微培養(yǎng)板生長的哺乳動物細(xì)胞中分離DNA2021/12/20
原理本方案由Ramirez-solis等的方法1992，1993改進(jìn)而成，是一種從微培養(yǎng)板的每個孔生長的真核細(xì)胞抽提基因組DNA的簡便有效的方法。每個孔產(chǎn)生的基因組DNA足以做數(shù)次聚合酶鏈反應(yīng)（PCR...
CPB沉淀法純化放射性標(biāo)記的寡核苷酸實驗2021/12/20
材料與儀器十六烷基溴化吡啶EDTA-TrisEDTA-Tris-DNA溶液乙醇-乙酸鈉溶液乙醇乙酸鈉TE(pH7.6)或適當(dāng)?shù)念A(yù)雜交液核酸和寡核苷酸純化的原料干冰乙醇浴步驟材料溶液和緩沖液稀釋貯存液至...
從大規(guī)模裂解物中制備λ噬菌體顆粒實驗2021/12/20
原理從大規(guī)模培養(yǎng)物中制備的λ噬菌體，可在高鹽存在下用聚乙二酵(PEG)沉淀的辦法從裂解物中回收得到。殘余的細(xì)胞碎片和PEG可用氯仿抽提。在進(jìn)一步純化之前，建議測定噬菌體制備物的得率。材料與儀器大腸桿菌...
cDNA文庫構(gòu)建2021/12/20
原理cDNA文庫是指某生物某發(fā)育時期所轉(zhuǎn)錄的全部mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。經(jīng)典cDNA文庫構(gòu)建的基本原理是用Oligo(dT)作逆轉(zhuǎn)錄引物，或者用隨機(jī)引物，給...
乙醇沉淀法2021/12/17
原理DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時,乙醇會奪DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般實驗中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合,其乙醇的最終含量占67%左右。因而也可改用...
測定用乙醇固定的 DNA 的含量2021/12/17
原理DNA和RNA在260nm處有一很高的吸收峰，利用這個原理我們測其OD260，再推算出其濃度。材料與儀器細(xì)胞樣品PBS緩沖液70%乙醇PI液離心機(jī)恒溫箱篩網(wǎng)步驟一、培養(yǎng)細(xì)胞的DNA含量的測定制備單...
BSP克隆測序法2021/12/17
材料與儀器【材料】DNA目標(biāo)片段；【試劑】亞硫酸氫鹽；步驟基因組DNA制備亞硫酸氫鹽修飾DNA純化與回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆測序注意事項1、組織樣本：-20℃或-80℃低溫冰箱中保存，液氮或者干冰運輸；...
變性RNA在膜上的轉(zhuǎn)移和固定2021/12/17
原理多數(shù)情況下，為檢測特定的靶mRNA，需先將RNA通過瓊脂糖電泳分離后，再從膠上轉(zhuǎn)移到二維支持物上，（通常用尼龍膜)，再與持異的標(biāo)記探針雜交。正如在Nonhem雜交中討論的情況，實驗者可采用多種試劑...
哺乳動物 DNA 的快速分離2021/12/17
原理根據(jù)本方案制備的哺乳動物DNA約20~50kb，適于作PCR反應(yīng)的模板。DNA產(chǎn)量在0.5到3.0μg/mg組織之間變化，或者是5~15μg/300μl全血。材料與儀器無DNase的RNase蛋白...
哺乳動物細(xì)胞抽提物中熒光素酶的測定實驗2021/12/16
原理螢光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細(xì)胞中不含內(nèi)源性螢光素酶，一旦轉(zhuǎn)錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶，同時在所有的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中，它的光產(chǎn)物具有最高的量子效率，檢測靈敏度高。熒光素酶報告基因被廣...
薄層層析法測定氯霉素?；D(zhuǎn)移酶含量實驗2021/12/16
材料與儀器用攜帶感興趣DNA的pCAT載體轉(zhuǎn)染的哺乳動物培養(yǎng)細(xì)胞CAT反應(yīng)混合物1乙基乙酸裂解緩沖液不含鈣鹽和鎂鹽的磷酸鹽緩沖液薄層層析（TLC)溶劑Tris-Cl放射性墨水干冰乙醇浴不溶于乙醇的墨水...
BAL31 核酸酶消化法產(chǎn)生雙向缺失突變體實驗2021/12/16
材料與儀器BAL31緩沖液EGTA乙醇酚氯仿醋酸鈉蔗糖凝膠上樣緩沖液TE噬菌體T4DNA聚合酶BAL31核酸酶大腸桿菌DNA聚合酶IKlenow片段限制性內(nèi)切酶瓊脂糖凝膠用于凝膠電泳的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)...
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