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怎樣選擇合適的血漿游離DNA提取試劑2023/8/9
1、什么是血漿游離DNA？血漿游離DNA，是指血液中游離于細胞外的DNA，其來源主要有三：白細胞崩解釋放的DNA、壞死組織特別是腫瘤組織釋放入血液的DNA和感染病毒、細菌的DNA。目前，游離DNA已作...
如何高效將質(zhì)粒轉染至A549細胞2023/8/9
關于A549細胞1：細胞名稱:人非小細胞肺癌細胞(A549細胞)2：形態(tài)特性:上皮樣，多角形3：生長特性:貼壁生長StarVio-A質(zhì)粒DNA轉染試劑1：轉染效率在貼壁細胞中可高達90%以上2：極低的...
siRNA轉染操作及要點2023/8/7
轉染試劑儲存轉染試劑-20°C避光保存，TransEnhancer于2-8°C存放體外轉染操作流程1：細胞接種:轉染前一天接種細胞，使細胞在轉染時密度在30-50%2：siRNA-Starvio轉染復...
如何高效將質(zhì)粒DNA轉染至293細胞系2023/8/7
關于293細胞系293細胞(人胚腎細胞)系包括AAV293、HEK293、293T293F、293A等細胞株，是進行病毒包裝和重組蛋白表達最為常用的工程細胞之一。特別是AAV293細胞，目前已成為腺相...
如何提高 RT-PCR 反應的靈敏度與特異性2023/6/30
1.首先確定模板RNA完整性好，無DNA污染。2.RNA模板中不應含有擴增反應抑制劑。3.為了防止模板降解，在反應體系中加入RNase抑制劑RNasin。4.使用適量的模板RNA，模板量太多會降低特異...
避免 RNA 降解的方法以及RNA 中含有逆轉錄抑制劑時的處理2023/6/30
避免RNA降解的方法：1.在用來驗證完整性之前先在變性膠上分析RNA。2．使用良好無污染技術分離RNA。3.將組織從動物體取出后立刻提取RNA，并將提取好的RNA反轉錄為cDNA進行低溫保存。RNA中...
RT-PCR的靈敏度低2023/6/30
可能原因1：RNA問題（包括：RNA被損害和降解；初始模板RNA不充分）。解決方法：如果全損害或者降解的話，更換RNA；增加模板RNA的濃度；使用10ng-1μg的總RNA。可能原因2：儀器故障。解決...
RT-PCR的非特異信號2023/6/30
可能原因1：引物問題（包括：引物二聚體太多）。解決方法：檢查引物設計環(huán)節(jié)和合成環(huán)節(jié)，必要時重新設計和合成引物?？赡茉?：擴增酶問題。解決辦法：選擇hotstartTaq酶進行擴增，可提高靈敏度，增加...
RT-PCR的無擴增產(chǎn)物2023/6/30
可能原因1：引物問題（包括：引物設計較差，引物合成較差，引物濃度太低）。解決方法：設計引物的時候，避免在引物3'端含有互補序列；避免可以形成內(nèi)部發(fā)卡結構的序列；設計Tm類似的引物。針對引物合成的問題，...
消滅 PCR 非特異性擴增的方法2023/6/28
非特異性擴增，即進行PCR所擴增出來的條帶不是所要的，引物與模板在非目的條帶處有錯配，導致延伸產(chǎn)物不是目的條帶。例如引物二聚體，即引物在退火過程中產(chǎn)生了hairpin結構或其他二級結構，或者引物在模板...
DNA 復制需要哪些元素2023/6/28
1)需要脫氧核苷三磷酸：進行DNA合成必須具備的2個關鍵底物之一，即4種脫氧核苷三磷酸——dGTP、dCTP、dATP、dTTP。通常商品化PCR酶會提供這4種脫氧核苷三磷酸的混合物dNTP。2)需要...
miRNA 成熟過程中的關鍵性酶和蛋白2023/6/27
RNApolymeraseII：一般認為miRNA基因由RNApolymeraseII轉錄而來?？蓪iRNA基因轉錄成5'端蓋帽m7G和3‘端加尾polyA結構。Drosha：Drosha蛋白為RN...
lncRNA 的生物學功能（二）2023/6/27
一）lncRNA對于細胞周期及凋亡的調(diào)控作用有研究報道，lncRNA可以通過調(diào)節(jié)細胞周期和凋亡的方式，來影響細胞的增殖。例如，Gas5（growtharrest-specific5，非編碼RNA）在細...
lncRNA 的生物學功能（一）2023/5/17
（一）lncRNA對于細胞周期及凋亡的調(diào)控作用有研究報道，lncRNA可以通過調(diào)節(jié)細胞周期和凋亡的方式，來影響細胞的增殖。例如，Gas5（growtharrest-specific5，非編碼RNA）在...
構建載體2023/5/5
構建載體最關鍵的一步就是設計引物引入酶切位點，一旦引物設計好，那接下來就非常簡單了，今天重點就來教教大家如何利用snapgene輕松獲得構建載體所需的引物序列。1.打開軟件，選擇第一個（紅線標記），然...
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