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當(dāng)前位置:深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>穩(wěn)定載體時,為什么載體上通常有兩個抗性基因?
構(gòu)建的載體上有兩個抗性基因,但一般只有一個抗性用來篩細胞。兩個抗性基因的本質(zhì)區(qū)別是什么呢?
我們來看看這個例子,現(xiàn)在這個是pcDNA3.1質(zhì)粒的圖譜,載體上有兩個抗性基因,Amp(氨芐青霉素)和Neo(新霉素)。
氨芐青霉素是在bla啟動子驅(qū)動下表達,bla是原核表達啟動子,在大腸桿菌可以表達,因此,轉(zhuǎn)化后的質(zhì)粒用Amp可以篩選出來。
而新霉素是在SV40啟動子驅(qū)動下表達,SV40是真核表達啟動子,轉(zhuǎn)入真核細胞后表達,所以只有轉(zhuǎn)進了載體的細胞才能被篩選出來。
所以,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時,載體上的兩個抗性基因,一個用于構(gòu)建克隆時篩選細菌,另一個用來對轉(zhuǎn)染細胞的篩選。
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