簡介：

 HCMEC/D3細胞系來自于癲癇患者手術切除的富含腦內(nèi)皮細胞（CECs）的組織，并從中分離出人顳葉微血管。后續(xù)使用人端粒酶（hTERT）和SV40大T抗原的催化亞基通過慢病毒載體轉(zhuǎn)導，使細胞依次永生化后，通過有限稀釋克隆法選擇性分離CEC，最終鑒定所得的細胞，具有廣泛的腦內(nèi)皮細胞表型特征?？杀磉_大量內(nèi)皮細胞；可在基質(zhì)膠上形成毛細血管樣結(jié)構(gòu)；可作為人血腦屏障（BBB）模型。可用于研究內(nèi)皮細胞，血管，藥物攝取與主動轉(zhuǎn)運機制等。

培養(yǎng)條件：

 內(nèi)皮細胞專用基礎培養(yǎng)基-EMC培養(yǎng)基+5%FBS+1%內(nèi)皮細胞生長添加物和1%青霉素/鏈霉素溶液。置于37°C，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

消化（10cm皿為例）：

1. 當單層培養(yǎng)細胞匯合達80%。

2. 棄去舊培養(yǎng)基，2mlPBS潤洗兩次。

3. 用1ml含0.25%ETDA的胰蛋白酶消化1-2min（在培養(yǎng)箱放1min，然后鏡下觀察變圓）。

4. 用1ml（血清）細胞培養(yǎng)基終止消化，九宮格法吹落細胞收集到離心管，以800-1000rpm，室溫離心5min。

傳代：

以1:2~1:3的比例傳代，離心棄去廢液，用2ml~3ml（血清）細胞培養(yǎng)基充分重懸細胞沉淀成單個細胞，以“"Z“"字打入含有7ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中，輕柔十字晃勻不超過十下并靜置數(shù)分鐘后鏡下觀察，平穩(wěn)放入培養(yǎng)箱中。

凍存：

1. 凍存液的配置為血清：二甲基亞砜(DMSO)=9:1。

2. 取長勢良好，匯合度達80%-90%并無污染的細胞，消化離心后用1.5ml凍存液重懸后轉(zhuǎn)移至凍存管中，標記好細胞種類、日期、操作者，放入恢復室溫的梯度凍存盒，一同放置于-80°C冰箱。

復蘇：

準備好離心管中放入3ml（血清）細胞培養(yǎng)基，并確保水浴鍋打開并達到37°C，從-80°C冰箱取出目標凍存管，放入密封袋并在水浴鍋中迅速搖晃解凍<1min，與3ml培養(yǎng)基混合均勻。在1000rpm，離心5分鐘，棄去上清液，用新培養(yǎng)基重懸細胞為單個細胞狀態(tài)，加入10cm皿中，培養(yǎng)過夜。

注意事項：

1.ECM細胞培養(yǎng)基又稱內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基，是專門為人類微血管內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)設計的最合適其生長的（血清）細胞培養(yǎng)基，包括必需和非必需氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)和低濃度胎牛血清（5%）。

2.該培養(yǎng)基的配方能夠選擇性的促進正常人類微血管內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)中的增殖和生長。

3.嘗試過使用DMEM（高糖）培養(yǎng)基、M199培養(yǎng)基，考慮可能由于不含生長因子，多代后細胞形態(tài)發(fā)生改變，碎片增多。

4.ECM細胞培養(yǎng)基中的數(shù)種成分是怕光的，所以推薦培養(yǎng)基不要長時間暴露在光中。避光4°C保存，配好的培養(yǎng)基需要在一個月內(nèi)使用。

5.HCMEC/D3細胞十分耐造，正常培養(yǎng)即可。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

  深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領域的產(chǎn)品供應線，在各個領域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務。 專業(yè)的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學領域科研的老師和同仁。