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砷鉬酸比色法

時間:2023/1/16閱讀:843
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原理

還原糖是具有羰基(>C=O)的糖,能將其它物質(zhì)還原而其本身被氧化。

(1) 還原糖在堿性條件及有酒石酸鉀鈉存在下加熱,可以定量地還原二價銅離子為一價銅離子,產(chǎn)生磚紅色的氧化亞銅沉淀,其本身被氧化。具體反應(yīng)如下:


(2)氧化亞銅在酸性條件下,可將鉬酸銨還原,還原型的鉬酸銨再與砷-酸氫二鈉起作用,生成一種藍(lán)色復(fù)合砷鉬藍(lán),其顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖的含量(即被還原的Cu2O 量)成正比,用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖與砷鉬酸作用,比色后做標(biāo)準(zhǔn),就可測得樣品還原糖含量。

材料與儀器

植物材料
銅試劑 砷鉬酸試劑 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖原液
分光光度計(jì) 具塞刻度試管 水浴鍋 刻度吸管 容量瓶 漏斗 研缽

步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:


在一系列刻度試管中,分別加入200μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5及0.6 mL,再順序加入蒸餾水2、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5 及1.4 mL,配成濃度分別為0、10、20、30、40、50 及60μg/mL 的系列葡萄糖溶液。每試管加入銅試劑2mL,混勻后沸水浴中加熱10min,立即冷卻,再加入2mL 砷鉬酸試劑,振蕩兩分鐘后稀釋到20mL,用分光光度計(jì)在620nm 波長下比色,測其光密度OD620nm(做一式兩份)。以糖濃度微克數(shù)為橫坐標(biāo),光密度OD620nm 為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。


2.植物樣品中還原糖的提取:


將樣品洗凈,吸干其表面水分,切碎混勻,稱取1g 放入研缽中,加入約0.5g 石英砂,磨成勻漿,加水將樣品由玻璃漏斗沖入100mL 容量瓶中,加水達(dá)70-80mL,搖勻后置于80℃恒溫水浴上浸提0.5h。


待上述樣品冷卻后,沉淀蛋白質(zhì),加入5%硫酸鋅5mL,再慢慢滴入0.3mol/L Ba(OH)2 5mL,以沉淀蛋白質(zhì)。振蕩后靜置,至上層出現(xiàn)清液后再加一滴Ba(OH)2,直至無白色沉淀時,向容量瓶加水至刻度。


3.還原糖含量的測定:


過濾上述已定容的樣品液,取5mL 濾液,再定容到100mL(此步視樣品的含糖量而定)。取已稀釋的溶液2mL,與標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖顯色法相同:加銅試劑2mL,煮沸10min,加砷鉬酸試劑2mL,振蕩2mL,定容到15ml,620nm 波長下比色,記下光密度OD620nm(至少重復(fù)兩次)。

注意事項(xiàng)

比色皿的外面應(yīng)被擦干凈。

常見問題

OD是當(dāng)光經(jīng)過一個樣本時,部分光會被吸收。在光譜學(xué),透光率是出射光和入射光強(qiáng)度的比。


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安培生物科技有限公司介紹:

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。


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