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消除微生物污染

時間:2023/1/6閱讀:1044
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原理

通過沖洗單層培養(yǎng)物或通過離心重懸非貼壁細胞,以高濃度抗生素清洗培養(yǎng)物數(shù)次,然后將培養(yǎng)物傳代,用加抗生素的培養(yǎng)基傳三次,再用不加抗生素的培養(yǎng)基傳三次,每次傳代后都要檢測是否污染。

材料與儀器

DBSS
高濃度抗生素培養(yǎng)液
用于傳代培養(yǎng)的材料 帶有40×或60×物鏡的相差顯微鏡 用于支原體染色的材料

步驟

1. 仔細收集污染培養(yǎng)液,如有可能,應測試該有機體對一系列抗生素的敏感性,如果做不到,則應對培養(yǎng)液進行高壓滅菌或加入次氯酸鹽。

2. 用 DBSS 沖洗細胞(每一次沖洗可使污染物濃度減少兩個對數(shù)級,除非污染物黏貼在細胞上)。

(a)對于單層培養(yǎng)物,用 DBSS 沖洗培養(yǎng)物三次,然后用胰蛋白酶處理,再用 DBSS 通過離心與再懸浮清洗細胞兩次以上。

(b)對于懸浮培養(yǎng)物,通過離心和重懸,用 DBSS 沖洗培養(yǎng)物 5 次。

3. 將細胞以盡可能低而又合適的細胞濃度接種于新的培養(yǎng)瓶內。

4. 加入含高濃度抗生素的培養(yǎng)基,每兩天換一次。

5. 用高濃度抗生素培養(yǎng)基進行傳代培養(yǎng)。

6. 重復進行 1~4 的步驟,傳代培養(yǎng)三次。

7. 移去抗生素,在無抗生素情況下,將這些細胞再進行三次傳代培養(yǎng)。

8. 用相差顯微鏡及 Hoechst 染色檢査培養(yǎng)物。

9. 對這些細胞再進行兩個月的培養(yǎng),不加抗生素,檢査以確定所有污染已被消除。

常見問題

一般的原則是應將污染的培養(yǎng)物丟棄,而不要試圖去除污染,除非是至關重要必須保留的細胞系才考慮去除污染。在任何情況下,很難做到完-全消除污染。特別是在酵母污染時,如果試圖去除污染,可能導致產生更頑固的對抗抗生素的細胞。


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