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體外培養(yǎng)的細胞直接生活在培養(yǎng)基中,因此培養(yǎng)基需要滿足細胞對營養(yǎng)成分、促生長因子、激素、滲透壓、pH等諸多方面的要求;原代提取的時候選擇如何選擇培養(yǎng)基成了關(guān)鍵的問題,此外在細胞提取的時候因血清可以模擬個體的生存環(huán)境,在提取細胞的時候血清必-不可少。
維持細胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個方面:氨基酸,單糖,維生素,無機離子與微量元素,此外還有促生長激素,滲透壓,pH 值,并保證在配制試劑的時候無毒無污染。
正常的培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基無非是基礎(chǔ)培養(yǎng)基加血清。血清是一個神秘的試劑,至今為止,它在細胞的生長繁殖發(fā)揮著重要甚至是難以替代的作用。
血清的主要成分: 血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等。
血清主要作用:提供基本營養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質(zhì)。
血清的判斷標準如下:好的血清應(yīng)該是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁、不透明、含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;一般血清反復凍融或者有支原體污染的時候都會出現(xiàn)血清沉淀多的情況,若血清呈棕紅色,說明血清中的血紅蛋白含量太高,取材時有溶血現(xiàn)象;如果搖晃時感覺液體稀薄,說明血清中摻入的生理鹽水太多。如果要進一步了解血清的質(zhì)量,則應(yīng)連續(xù)培養(yǎng)某些細胞,觀察細胞生長狀況。
質(zhì)量一般的血清在使用的時候建議滅活,即56℃30分鐘,主要是為了防止血清中的補體成分對細胞產(chǎn)生毒性,一般的血清不需要滅活,因為加熱也會導致一些刺激因子和蛋白的流失,不利于細胞的生長。
血清一般儲存于-20℃,同時應(yīng)避免反復凍融。反復凍融會導致血清中的蛋白釋出,從而會沉淀增多,購買大包裝的血清后,首先要滅活處理,然后分裝成小包裝,儲存于-20℃,使用前4度慢融。不同批次的血清會有很大的差異性,為了實驗統(tǒng)一和可重復性,建議購買血清之前先索取試用裝進行測試,選定一批后就要保留足夠使用6個月至1年的量,直至用另一批經(jīng)過預先試驗的樣品代替。
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