正常人外周血中 T 細(xì)胞在體外能直接和綿羊紅細(xì)胞（SRBC）結(jié)合形成玫瑰花樣細(xì)胞團(tuán)。這是因?yàn)槿说腡細(xì)胞膜上具有能和SRBC 膜上的糖蛋白相結(jié)合的受體，稱為E 受體。已證實(shí)E 受體是人T 細(xì)胞所*的表面標(biāo)志，因此本試驗(yàn)可作為人外周血T 細(xì)胞的鑒定和計(jì)數(shù)，同時(shí)作為人細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的一個(gè)檢測指標(biāo)，也是分離T 細(xì)胞的常用方法之一。本實(shí)驗(yàn)為示教內(nèi)容，學(xué)生只看結(jié)果。

材料與儀器

肝素抗凝人外周血
淋巴細(xì)胞分層液 SRBC懸液 Hank's液 NBS
血球計(jì)數(shù)板尖吸管載玻片瑞氏染液

步驟

1. 取肝素抗凝血1 ml 加1 ml Hank's 液，混勻后用尖吸管將其加在2 ml分層液上。

2. 離心2000 rpm，30 分鐘，用尖吸管吸取血漿與分層液界面處富含淋巴細(xì)胞的懸液置于另一潔凈試管中。

3. 用Hank's 液以1000 rpm，離心10 分沖洗細(xì)胞兩次，末次棄上清后再加入Hank's液1 ml，混勻，用微量加樣器吸取0.02 ml 加于0.38 ml 白細(xì)胞計(jì)數(shù)液中，在血球計(jì)數(shù)板上于低倍鏡下計(jì)數(shù)，并根據(jù)下式算出每毫升細(xì)胞數(shù)。然后用Hank's液配制成107 /ml細(xì)胞懸液。

4. 取107 /ml細(xì)胞懸液0.1 ml加0.1 ml經(jīng)SRBC吸收的滅活NBS，再加0.2 ml0.5 %SRBC懸液，混勻，放37 ℃溫箱5 分鐘，低速離心500 rpm，5 分鐘，然后放4 ℃冰箱2 小時(shí)或過夜。

5. 取出試管，輕輕使沉淀的細(xì)胞懸浮，用尖吸管取出一滴置于載玻片上，蓋上已滴加瑞氏染液的蓋玻片，于高倍鏡下觀察計(jì)數(shù)。

注意事項(xiàng)

1. SRBC 自綿羊體內(nèi)取出后限在2 周內(nèi)使用。

常見問題

一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

計(jì)數(shù) 200 個(gè)淋巴細(xì)胞，凡結(jié)合3 個(gè)SRBC 以上者為E 玫瑰花陽性細(xì)胞，求出百分率即為T 細(xì)胞百分比。正常值為68±9.9%。

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E玫瑰花環(huán)形成試驗(yàn)

原理

材料與儀器

步驟

注意事項(xiàng)

常見問題

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