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深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第4年

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血清系列
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實(shí)驗(yàn)耗材
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夏天到了,您做好預(yù)防細(xì)胞污染了嗎?

時(shí)間:2022/6/17閱讀:1803
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注意事項(xiàng):

夏天到了,天氣炎熱,空氣中的溫度濕度都在上升,這時(shí)最易滋生細(xì)菌等微生物,導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)過程會(huì)沒有那么的順利,總是被污染,而且微生物繁殖的速度非??臁=裉煳覀兙蛠碚f道說道細(xì)胞污染應(yīng)該怎么預(yù)防、處理。


目前細(xì)胞污染大致可分為:細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲、病毒等污染。那么想要解決問題,我們就需要知道細(xì)胞是遭受了何種污染,才可對(duì)癥下藥。接下來我們將帶領(lǐng)大家逐步分析這些污染。



細(xì) 菌


細(xì)菌污染時(shí),培養(yǎng)基在短時(shí)間內(nèi)變成黃色或白色渾濁,有時(shí)稍加震蕩,便會(huì)有很多混濁物漂起。有些狀況下培養(yǎng)基顏色改變不明顯但細(xì)胞形態(tài)會(huì)變異(出現(xiàn)多角,多核狀況)、細(xì)胞不附著。


細(xì)菌屬于原核生物,比細(xì)胞小很多,在顯微鏡下或成黑色細(xì)沙狀,或背景有大量黑點(diǎn)。可能造成細(xì)胞增殖緩慢或形態(tài)上的改變(多角、多核等),細(xì)胞質(zhì)中產(chǎn)生空泡、細(xì)胞不附著。


如遇細(xì)菌污染,我們可以如何處理呢?

合理使用相應(yīng)抗生素可殺滅細(xì)菌:

抗生素作用對(duì)象使用比例儲(chǔ)存條件
卡那霉素溶液細(xì)菌(如G+、G-)、支原體稀釋:1:100-20oC
硫酸慶大霉素溶液細(xì)菌(如G+、G-)、支原體稀釋: 1:1000AMB室溫(15-30℃)
青鏈雙抗細(xì)菌(如G+、G-)稀釋: 1:100-20oC
青鏈雙抗,10濃縮液細(xì)菌(如G+、G-)稀釋: 1:1000-20oC
青鏈霉素,制霉菌素三抗細(xì)菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋: 1:100-20oC
青鏈霉素,兩性霉素素B三抗細(xì)菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋: 1:100-20oC
青鏈霉素,新霉素三抗細(xì)菌(如G+、G-)稀釋: 1:100-20oC



真 菌


真菌指的是類似棉絮狀的漂浮物,真菌是真核生物,比細(xì)胞大。在顯微鏡下可觀察到菌絲體,真菌有菌絲體,呈絲狀、管狀、樹狀、串珠狀。真菌一般呈菌落聚集生長(zhǎng)。污染早期不會(huì)使培養(yǎng)基變黃。


細(xì)胞被真菌污染后,仍可生長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間細(xì)胞的活力狀態(tài)會(huì)變差,梅雨季時(shí)的污染率會(huì)提高。


真菌的種類也比較多:酵母菌、念珠菌、霉菌(青霉菌、根霉菌、曲霉)、蕈菌等。這些菌類都有各自的特點(diǎn),很容易區(qū)分。



酵母菌:成串的卵狀物,體積為細(xì)胞的1/5~1/10倍,可由出芽生殖時(shí)的一大一小連體結(jié)構(gòu)識(shí)別,污染嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成培養(yǎng)基pH值改變,不易去除。


念珠菌:卵圓狀,在細(xì)胞周邊生長(zhǎng)。

霉菌:霉菌在我們的生活中無處不在,它比較青睞于溫暖潮濕的環(huán)境,一有合適的環(huán)境就會(huì)大量的繁殖,有綠色,毛茸茸的青霉菌,還有像樹根一樣根霉菌。


如果發(fā)現(xiàn)真菌污染,我們?nèi)绾芜M(jìn)行處理呢?

合理使用相對(duì)應(yīng)的抗生素,可有效殺滅真菌污染:





抗生素作用對(duì)象使用比例儲(chǔ)存條件
兩性霉素素B真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋:1:1000 ~ 1: 10,000-20oC
制霉菌素真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋:1:100 ~ 1:1000-20oC
青鏈霉素,制霉菌素三抗細(xì)菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋: 1:100-20oC
青鏈霉素,兩性霉素素B三抗細(xì)菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋: 1:100-20oC



支 原 體


支原體常來源于實(shí)驗(yàn)人員(支原體常見于人體皮膚、呼吸道、生殖道和消化道)、動(dòng)物源血清及胰酶、消毒不*的器具,體積只有0.15~0.3μm,所以能通過一般培養(yǎng)基0.2μm過濾膜進(jìn)入培養(yǎng)基體系,培養(yǎng)基不會(huì)變黃,所以污染時(shí)不容易用常規(guī)方法發(fā)現(xiàn),光學(xué)顯微鏡難以辨識(shí)。






支原體革蘭染色為陰性,大部分支原體繁殖速度比細(xì)菌慢,對(duì)青霉素類的抗生素不敏感。污染不但會(huì)緩慢的改變細(xì)胞形態(tài)(拉絲、鋪展)、增殖、基因表達(dá)、蛋白合成及代謝反應(yīng),它攜帶的DNA/RNA與蛋白更可能造成QPCR或Western Blot結(jié)果偏差。


方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)的使用方法:


  1. 加1ml的 BIOMYC-1 溶液至100ml培養(yǎng)基中,保持受污染的細(xì)胞在混合液中培養(yǎng)4天,期間可用含 BIOMYC-1 的新培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代;

  2. 4天后,加1ml BIOMYC-2 溶液至100ml的新培養(yǎng)基中,并維持培養(yǎng)3天,期間可進(jìn)行傳代。

  3. 以上是一個(gè)處理周期,必要時(shí)可繼續(xù) 2-3 次處理周期。

  4. 每過一個(gè)周期,細(xì)胞需要做支原體污染檢測(cè),以確認(rèn)效果,從而適當(dāng)減少實(shí)驗(yàn)過程。


方案二:BIOMYC-3(03-038)的使用方法:

  1. 加1ml BIOMYC-3至100ml培養(yǎng)基中;

  2. 持續(xù)培養(yǎng)14天,期間可進(jìn)行傳代;

  3. 以上是一個(gè)處理周期,必要時(shí)可繼續(xù) 2-3 次處理周期。

  4. 每過一個(gè)周期,細(xì)胞需要做支原體污染檢測(cè),以確認(rèn)效果,從而適當(dāng)減少實(shí)驗(yàn)過程。



提 示


支原體殺除試劑對(duì)實(shí)驗(yàn)幾乎沒有影響,可進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn);如果客戶使用其中一種方案,不能清除支原體,說明該支原體可能在另一種方案的抑菌譜內(nèi);最佳方案是先用方案一處理一周期,再用方案二處理一周期,然后做支原體檢測(cè)。



黑 膠 蟲


目前科學(xué)界對(duì)黑膠蟲并無定論,認(rèn)為是不明沉淀現(xiàn)象或多種未知生物污染現(xiàn)象的通稱。


黑膠蟲不是一個(gè)新的物種,是大家對(duì)顯微鏡下會(huì)活躍游動(dòng)或原代打轉(zhuǎn)、顫動(dòng)的未經(jīng)測(cè)序鑒定的微生物的別稱。因?yàn)槎喑屎邳c(diǎn)的游動(dòng),被大家稱為“黑膠蟲"。實(shí)際上,它不是蟲子,經(jīng)過我們對(duì)多個(gè)客戶提供的黑膠蟲樣本測(cè)序,發(fā)現(xiàn)實(shí)際上它是各種細(xì)菌。大多數(shù)細(xì)菌都有鞭毛,這也就不難理解,它為啥會(huì)像蟲子一樣游動(dòng)或原地打轉(zhuǎn),顫動(dòng)。



在高倍率顯微鏡頭下,可觀察到各式形狀的小黑點(diǎn)(卵圓狀、球狀、桿狀等)、活躍的布朗運(yùn)動(dòng)及明顯游動(dòng)現(xiàn)象。

復(fù)蘇或傳代時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)黑膠蟲污染,并且與細(xì)胞呈現(xiàn)此消彼長(zhǎng)的現(xiàn)象,部分黑膠蟲具有細(xì)胞毒性,可引起細(xì)胞生長(zhǎng)遲緩或裂解凋亡,培養(yǎng)基不渾濁。



方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)和三抗(03-033)的使用方法:


  1. 加1ml的 BIOMYC-1 和三抗溶液至 100ml培養(yǎng)基中,保持受污染的細(xì)胞在混合液中培養(yǎng) 4 天。期間需加入含 BIOMYC-1和三抗溶液的少許的新培養(yǎng)基;

  2. 4天后,加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至 100ml 的新培養(yǎng)基中,并維持培養(yǎng) 3 天;

  3. 以上是一個(gè)處理周期,必要時(shí)可繼續(xù) 2-3 次如上處理循環(huán)。 


方案二:BIOMYC-3(03-038)和三抗(03-033)的使用方法:

  1. 加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100ml培養(yǎng)基中;

  2. 持續(xù)培養(yǎng)14天,期間每2-3天更換一次培養(yǎng)基;

  3. 以上是一個(gè)處理周期,必要時(shí)可繼續(xù) 2-3 次如上處理循環(huán)。

  4. 在處理過程中,細(xì)胞需要做支原體污染檢測(cè),以確認(rèn)效果,從而適當(dāng)減少實(shí)驗(yàn)過程。 



以上污染與實(shí)驗(yàn)室環(huán)境,溫度濕度等都有較大的關(guān)系,因此細(xì)胞房我們也需要提前做好預(yù)防。




以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

 

安培生物科技有限公司介紹:

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)


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