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小鼠皮脂腺的油紅染色實驗步驟

時間:2021/12/12閱讀:2242
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材料與儀器


器材:棕色可密封瓶、研缽、漏斗、定性濾紙、冷凍切片等
試劑:

① 油紅染料(稱取預先研磨粉碎的 0.5 g 油紅干粉,溶于少量異丙醇中,然后加異丙醇至 100 ml,棕色瓶密封(或錫箔紙包裹避光)4 ℃ 保存,為儲存液,可長期保存。用時油紅工作液需現(xiàn)配:取 6 ml 加三蒸水 4 ml 混勻,定性濾紙過濾,稀釋后數(shù)小時內(nèi)用完)


② 異丙醇


步驟


小鼠皮脂腺的油紅染色實驗的基本過程可分為如下幾步:

1. 將冷凍切片從冰箱中取出,晾干。

2. 用 PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘。

3. 用 4% 多聚甲醛固定 5~10 分鐘。

4. 用蒸餾水洗兩遍,每次 5 分鐘。

5. 將切片放入 60% 異丙醇洗兩遍,每次 5 分鐘。

6. 將切片放入油紅工作液染色 15 分鐘。

7. 用 60% 異丙醇洗兩遍,每次 5 分鐘。

8. 用蒸餾水洗兩遍,每次 5 分鐘。

9. 蘇木素復染 2 分鐘。

10. 水充分漂洗 10 分鐘,把周圍水分抹干。

11. 封片劑封片,鏡檢。結(jié)果示例如圖 8-11-2 所示。


注意事項


1. 由于脂肪易溶于有機溶劑,所以顯示脂肪一般不能像石蠟切片一樣處理,而通過冷凍切片染色來顯示。
2. 做脂肪染色的冷凍切片不能太薄,過薄的切片常會使脂質(zhì)丟失。
3. 蘇木素復染時間不能過長。
4. 染色結(jié)果不能長期保存,應盡快觀察及照相。


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