SH-SY5Y細胞于1970年構(gòu)建，是骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞系經(jīng)3次克隆后得到的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。

如今，SH-SY5Y細胞已經(jīng)是科學研究中較為常用的細胞系之一了。

但很多人在養(yǎng)SH-SY5Y細胞的過程中，總會遇到各種問題。今天，小編來為大家一一解答。

常溫運輸過程中，細胞不免受到震蕩和溫度變化的影響，出現(xiàn)皺縮、聚團甚至脫落的現(xiàn)象。

遇到這種情況，不用緊張，只要正確處理，細胞就能恢復正常生長。

常溫細胞收貨后，把細胞放進培養(yǎng)箱靜置2-4小時即可。

如果4小時后細胞仍然沒有鋪展開，密度適中的前提下可以放培養(yǎng)箱中靜置過夜（過夜前倒出部分培養(yǎng)基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松）。

常溫細胞收貨后，先把細胞放進培養(yǎng)箱靜置2-4小時以穩(wěn)定狀態(tài)，再進行傳代。

傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。

常溫細胞收貨后，先把細胞放進培養(yǎng)箱靜置2-4小時以穩(wěn)定狀態(tài)再處理。

脫落后的細胞通常聚團漂浮，通過離心將漂浮的細胞團收集起來，在離心管里進行胰酶消化后重新鋪板即可。

貼壁細胞常規(guī)方法消化下來，和處理好的脫落細胞合并，混勻后鋪板。

SH-SY5Y細胞生長較緩慢。在培養(yǎng)過程中，有以下幾點需要注意。

MEM/F12和DMEM/F12都可以培養(yǎng)SH-SY5Y，并且都有相應的文獻支持。但這兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的形態(tài)會有細微差異。

另外，使用品質(zhì)好的胎牛血清將極大改善細胞生長狀態(tài)。

因其神經(jīng)母細胞瘤的特性，SH-SY5Y細胞成簇生長，飽和密度大。

有時顯微鏡下看著密度不高，但細胞簇實際密度大，所以培養(yǎng)基很快就變黃了。這時候，需及時換液。

當細胞培養(yǎng)一周都無法傳代時，可以將細胞消化下來，接種到更小的容器中，人為增加細胞密度，從而促進細胞生長。

平時傳代時也要注意接種密度不能太低。

不建議連續(xù)消化細胞，連續(xù)消化細胞會導致細胞狀態(tài)變差。

傳代時消化時間不宜過長，通常1-3min即可，若細胞解離太快可適當用PBS稀釋胰酶。

吹打細胞時，動作輕緩一些，減少對細胞的物理刺激。

▲ SH-SY5Y正常生長照片

SH-SY5Y細胞培養(yǎng)時，貼壁細胞和懸浮細胞同時存在，貼壁細胞呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于成簇生長，容易成團。

有文獻報道，SH-SY5Y在懸浮狀態(tài)也能維持生長。

SH-SY5Y生長時，大部分為貼壁細胞，少量為懸浮細胞。 如果SH-SY5Y出現(xiàn)大量懸浮的細胞，就需要引起注意了。

另外，SH-SY5Y細胞非常敏感，在受到溫度、化學或物理刺激后容易出現(xiàn)成團現(xiàn)象。

一個視野下，有少量成團現(xiàn)象，無需特殊處理。成團嚴重，幾乎沒有鋪展開的細胞并且培養(yǎng)數(shù)天未展開時，就需要按以下方法特殊處理一下了。

▲ 成團較嚴重的SH-SY5Y細胞