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轉染條件:
培養(yǎng)板:6孔板
轉染質粒DNA大?。?6000bp
轉染試劑用量:10ul
核酸用量:電訊
轉染時間:48小時
轉染試劑:Advanced DNA RNA轉染試劑(AD600150)
培養(yǎng)基:Z7181-500 胎牛血清
細胞凍存:CE70100T無血清細胞凍存液
操作步驟:
提前 1 天接種細胞:細胞匯合度在 60-80%左右,再進行轉染。
核酸復合物制備:將核酸與轉染試劑按照 1:1 關系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。
在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復合物:根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復合物,并輕輕混勻;細胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。
細胞換液:轉染 24 小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉染過程中不用換液。
分析結果:質粒 DNA 轉染 48-72 小時后熒光檢測轉染效率,48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,則在轉染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉染后 9 小時熒光檢測轉染效率,48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。
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