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補體介導法細胞毒實驗

時間：2021/11/1閱讀：1061
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材料與儀器

C57BL／6J小鼠
Hank’s液 單克隆抗體 補體 伊紅-Y染液
眼科剪 眼科鑷 平皿 不銹鋼網(wǎng) 試管 吸量管 尖吸管 載玻片 蓋玻片 顯微鏡

實驗步驟


一、實驗方法
 
1.  小鼠胸腺細胞懸液的制備：將4～6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死，取出胸腺放入已加入約4 ml冷Hank’s液的平皿中，在100目的不銹鋼網(wǎng)上研磨后，過篩，放入試管，離心1 000 rpm，5分鐘，用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細胞重懸于Hank’s液中，配成1×107/ml細胞懸液。
 
2.  取試管3支，標明順序，依據(jù)下表依次加入1×107/ml胸腺細胞懸液、抗小鼠Thy-1的單克隆抗體(最適稀釋度)及Hank’s液，放入37℃水浴30分鐘。
 
3.  取出后每管加入1%伊紅-Y染液1滴，混勻，室溫放置2分鐘。
 
4.  重新混勻后分別在一張載玻片上滴片，加蓋玻片鏡檢。先在低倍鏡下觀察，再用高倍鏡觀察，比較3管中細胞死活情況。
 
二、實驗結(jié)果
 
死細胞呈紅色，無光澤且腫脹變大；活細胞不著色、有光澤且形態(tài)正常。
 
高倍鏡下計數(shù)200個細胞并計算其中死細胞的百分數(shù)。計算公式如下：死細胞百分數(shù)= EQ EQ \F(實驗管死細胞數(shù)%-對照管死細胞數(shù)%，100%-對照管死細胞數(shù)%)



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