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深圳市安培生物科技有限公司

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血清系列: SERANA胎牛血清低內(nèi)毒素膠原蛋白 ZETA LIFE胎牛血清

細(xì)胞轉(zhuǎn)染: 活體轉(zhuǎn)染試劑 LIPO3000轉(zhuǎn)染試劑高效轉(zhuǎn)染試劑

支原體清除: 支原體去除試劑

細(xì)胞凍存: 無(wú)血清細(xì)胞凍存液

實(shí)驗(yàn)耗材: 多功能開(kāi)關(guān)器封板膜 PCR & qPCR 孔板 qPCR耗材 PCR耗材

分子試劑: 核酸提取純化核酸染料

細(xì)胞增殖與凋亡: 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)

Biozellen系列: 鼠尾膠原蛋白 3D基質(zhì)膠

培養(yǎng)基: 細(xì)胞添加劑無(wú)血清培養(yǎng)基

ELISA試劑盒: 豬ELISA試劑盒小鼠ELISA試劑盒

TOYOBO（東洋紡）: PCR相關(guān)試劑

ZYMO RESEARCH: 試劑盒

Greiner（格瑞納）: 細(xì)胞培養(yǎng)小室

IKA（艾卡）: 刀頭

化學(xué)發(fā)光底物（ECL）: ECL化學(xué)發(fā)光液

PROSPEC系列: 單胺氧化酶

Epigentek系列: 細(xì)胞分析試劑盒

微生物檢測(cè): 生化鑒定試劑盒

細(xì)胞生物學(xué): 細(xì)胞輔助試劑細(xì)胞檢測(cè)試劑

Corning康寧: 凍存管嵌套/小室

解離試劑: 胰蛋白酶

細(xì)胞類(lèi)-實(shí)驗(yàn)耗材: 細(xì)胞培養(yǎng)瓶細(xì)胞培養(yǎng)皿細(xì)胞培養(yǎng)板

原代細(xì)胞: 小鼠原代細(xì)胞

植物檢測(cè)系列試劑盒: 植物激素系列植物氧化與抗氧化系列植物氮代謝系列植物脂肪酸代謝系列植物固氮作用系列植物呼吸作用系列植物光合作用檢測(cè)試劑盒

SERANA: BSA

細(xì)胞系: 人源細(xì)胞系

生化試劑盒

環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）: 土壤氧化還原酶系列

類(lèi)器官培養(yǎng): 培養(yǎng)試劑盒

緩沖器和解決方案: 抗生素培養(yǎng)添加物隱窩增強(qiáng)劑保護(hù)液洗滌液凍存液解離液

生物三凝膠基質(zhì): 細(xì)胞外基質(zhì)

細(xì)胞因子分子: 抑制劑激動(dòng)劑

生物樣本庫(kù): 類(lèi)器官

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實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)化（一）

時(shí)間：2021/10/12閱讀：1903

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如果是病毒定量和SNP基因分型的實(shí)時(shí)熒光定量PCR，我們需要盡可能高特異性；如果是病原體、mRNA檢測(cè)，我們需要高靈敏度。

想要提高PCR擴(kuò)增效率、特異性及靈敏度，我們可以通過(guò)一系列措施優(yōu)化實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)。首先是靶序列的選擇。

1、選擇的靶序列合適長(zhǎng)度在50～150bp之間。較短的序列合成耗時(shí)短，擴(kuò)增時(shí)間縮短，因此污染DNA被擴(kuò)增的可能性降低。

2、選擇靶序列時(shí)，使用BLAST檢索分析靶序列是否存在多態(tài)性和測(cè)序錯(cuò)誤，并避開(kāi)。如果靶序列中出現(xiàn)重復(fù)序列，會(huì)降低PCR檢測(cè)靈敏度，也應(yīng)該避開(kāi)。

3、控制靶序列中GC含量≤60%。高GC含量，會(huì)影響靶序列在熱循環(huán)中的變性，也容易產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。

4、避免產(chǎn)生二級(jí)結(jié)構(gòu)。靶序列如果有反向重復(fù)的序列，容易產(chǎn)生二級(jí)結(jié)構(gòu)，影響引物、探針的雜交。

除此以外，我們還需要保證模板的質(zhì)量不會(huì)影響擴(kuò)增，實(shí)時(shí)熒光PCR的結(jié)果才有可靠性。例如損傷的DNA在PCR中不能充分?jǐn)U增，或者根本不能擴(kuò)增。同時(shí)，如果模板中存在抑制DNA聚合酶的試劑（DMSO等）和污染物（SDS等），也會(huì)影響PCR的可靠性。

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