小鼠心肌細胞使用方法和注意事項
小鼠心肌細胞分離自小鼠胚胎心臟組織,細胞呈多邊形等不規(guī)則形狀,2天以后大部分伸出偽足呈巴掌狀部分心肌細胞會出現搏動,成熟的心肌細胞增殖緩慢或不增殖。體外培養(yǎng)的小鼠心肌細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。小鼠心肌細胞采用混合酶解法制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶,細胞純度可達80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
小鼠心肌細胞使用方法:
1.取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2.待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3.細胞傳代
1)吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
小鼠心肌細胞注意事項:
1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月
2.在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作
3.傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)
4.該細胞只可用于科研