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PriCells: 原代細(xì)胞骨架的染色方法
PriCells: 原代細(xì)胞骨架的染色方法
微絲的顯示方法步驟：
1. 用PBS液漂洗蓋片培養(yǎng)的原代細(xì)胞3次，每次30s；
2. 用2%的甲醛/PBS液固定原代細(xì)胞3min；
3. 用0.5%的三硝基jia苯/PBS處理3次，每次10min；
4. PBS漂洗3次；
5. 用羅丹明（rhodamine）標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽（phalloidin）（1：10）室溫中反應(yīng)15min；
6. PBS漂洗3次；
7. 60%甘油+熒光防淬劑封片；
8. 熒光顯微鏡觀察；
微管的顯示方法：
1. 用PBS液漂洗蓋玻片的原代細(xì)胞3次，每次30s；
2. 在室溫中用3%甲醛/PBS固定20min；
3. 用PBS液再漂洗3次，每次1min，最后用濾紙吸干多余的PBS液；
4. 投入冷丙酮中（-10—-20℃）7min；
5. 用PBS漂洗3次，每次1min，最后用濾紙吸干多余的PBS液；
6. 向直徑6cm的干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的一級(jí)抗微管蛋白抗體，令小蓋片細(xì)胞面向下扣在抗體液上，覆以皿蓋，于37℃溫箱中放置45min—1h；
7. 向碟皿內(nèi)勻速緩慢滴加PBS，令蓋片浮起在液面，用鑷子夾出，按步驟3處理；
8. 向干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的熒光標(biāo)記的二抗，其后操作按步驟6進(jìn)行；
9. 按步驟7和3操作；
10.滴pH8.5的90%的甘油/PBS少許于載玻片上，把小蓋片的原代細(xì)胞面覆在大蓋片上；
11.將蓋片置于熒光顯微鏡下觀察；