PriCells: 原代細(xì)胞富爾根（Feulgen）反應(yīng)顯示DNA

基本原理：

顯示DNA的傳統(tǒng)方法是富爾根（Feulgen）反應(yīng)，切片先用稀鹽酸處理，DNA經(jīng)弱酸（1mol/L HCL）水解后，在60℃條件下使DNA分子中脫氧核糖與嘌呤之間的連接打開，脫氧核糖的一端釋放出醛基，并在原位與Schiff試劑反應(yīng)生成紫紅色產(chǎn)物。原理同PAS反應(yīng)，使細(xì)胞核DNA顯紫紅色。在此過程中RNA不受影響，故染色具有DNA特異性。準(zhǔn)確的溫度和鹽酸濃度，適宜的水解時(shí)間是成功的關(guān)鍵。水解過度或不足均降低染色強(qiáng)度。

配制試劑：

1.    1mol/L HCL:將8.5ml濃鹽酸和91.5ml蒸餾水混合即得；

2.    0.5%亮綠水溶液；

染色步驟：

1.    取培養(yǎng)于蓋玻片上的貼壁原代細(xì)胞，用Hanks液漂洗三次；

2.    在卡諾（Carnoy）固定液中固定10min，然后蒸餾水洗三次；

3.    移入60℃濃度為1mol/L的HCL中靜置10min；

4.    用蒸餾水漂洗幾次；

5.    放入Schiff試劑中靜置30—60min，可隨時(shí)檢查顯色情況；

6.    用自來水沖洗5min；

7.    再用蒸餾水漂洗；

8.    不同濃度梯度乙醇溶液脫水；

9.    用二甲苯透明、樹膠封片；

結(jié)果：

原代細(xì)胞核內(nèi)DNA顯紫紅色，細(xì)胞質(zhì)呈綠色；