PriCells: 正常小鼠原代破骨細(xì)胞培養(yǎng)方案

實(shí)驗(yàn)材料：

1. 正常小鼠乳鼠顱蓋骨組織；

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2；

3. 0.1%Ⅰ型膠原酶；

4. 培養(yǎng)器具：培養(yǎng)瓶或皿（用多聚賴氨酸包被）、200目不銹鋼網(wǎng)篩、眼科剪、鑷子等；

培養(yǎng)方法：

1. 選用出生1-3天小鼠乳鼠，處死，放入75%酒精中浸泡2—3分鐘，轉(zhuǎn)至超凈工作臺(tái)內(nèi)，取顱蓋骨；

2. 將組織放入含有1×PBS（pH7.2）中沖洗3次；

3. 用眼科剪將顱蓋骨剪成1×1mm3大小組織塊，轉(zhuǎn)至15ml離心管內(nèi)，加入0.1%Ⅰ型膠原酶，37℃水浴消化90min；

4. 加入含血清的培養(yǎng)基，終止酶反應(yīng)；

5. 將消化后的組織過200目網(wǎng)篩，收集濾液于15ml離心管中，1000rpm/min離心10min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計(jì)數(shù)細(xì)胞；

6. 調(diào)整細(xì)胞密度以合適的密度接種入培養(yǎng)瓶，放置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞長滿瓶皿的生長表面即可傳代；

7. PriCells-原代骨細(xì)胞細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

8. PriCells-原代骨細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑

9. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒；

10. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒；