PriCells: 動物小血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離

實(shí)驗(yàn)材料：

1. 兔、狗或大鼠等動物

2. 1×PBS，含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml，pH7.4

3. 0.2%Ⅰ型膠原酶

4. 眼科剪，眼科鑷

5. 慕絲線（7號線）、細(xì)鐵絲

6. 離心管（15ml、50ml）

實(shí)驗(yàn)方法：

1. 處死動物后，局部消毒取出主動脈，用加入抗菌素的PBS沖洗，放入盛有PBS的平皿中，摘除血管外的脂肪和結(jié)締組織。

2. 用細(xì)絲線結(jié)扎血管的一端，用鑷子輕輕夾住結(jié)扎側(cè)的末端，用一鐵絲將扎住的末端捅進(jìn)血管內(nèi)，將血管翻轉(zhuǎn)過來，使內(nèi)皮細(xì)胞面向外。血管另一側(cè)的末端也塞進(jìn)血管內(nèi)，用細(xì)絲線結(jié)扎住，使整個(gè)血管僅內(nèi)皮細(xì)胞暴露在外面。

3. 把血管放至盛有5mol 0.2%膠原酶的平皿中，置于37℃ CO2孵箱中消化10-15min，多次搖動平皿，以便內(nèi)皮細(xì)胞脫落。消化近結(jié)束時(shí)，在倒置顯微鏡下觀察，若大部分內(nèi)皮細(xì)胞已脫落，加少量培養(yǎng)液終止消化。

4. 將消化液收集到離心管中，1000r/min離心5min。加入培養(yǎng)基重懸制成細(xì)胞懸液，放入T25的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于37℃，含5%CO2的孵箱中培養(yǎng)。2天換液1次。

5. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

6. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑

7. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒

8. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒