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PriCells: 人或動物肺毛細血管原代內(nèi)皮細胞的分離
PriCells: 人或動物肺毛細血管原代內(nèi)皮細胞的分離
實驗材料：
1. 人或動物的肺部毛細血管
2. PBS，含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml
3. 3mg/ml中性蛋白酶、0.25%胰蛋白酶
4. 眼科剪，眼科鑷
5. 20μm尼龍篩、100μm尼龍篩
6. 離心管（15ml、50ml）
實驗方法：
1. 將動物麻醉后開胸取肺組織，將肺組織切成1cm3的小塊，用PBS沖洗干凈。剪去胸膜，剔除大血管。
2. 用勻漿機制備肺組織勻漿，然后放在20μm尼龍篩上沖洗，以去掉紅細胞和組織碎片。
3. 消化肺組織：將留在篩子上的組織懸浮于3mg/ml中性蛋白酶的培養(yǎng)液中，在37℃恒溫振蕩器中孵育16h。將消化液裝入離心管中離心（2000r/min，10min），沉淀物懸浮于含1mmol/L EDTA的0.25%胰蛋白酶液中，37℃孵育15min。
4. 加入*培養(yǎng)液終止胰蛋白酶消化，通過100μm尼龍篩，以去除結(jié)締組織碎片。將濾過液以2000r/min離心10min，并懸浮于培養(yǎng)液中，可進行細胞培養(yǎng)。
5. PriCells-原代內(nèi)皮細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
6. PriCells-原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)特制添加劑
7. PriCells-原代細胞分離試劑盒