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PriCells: 小鼠單個核細(xì)胞的分離
PriCells: 小鼠單個核細(xì)胞的分離
基本方案：
從脾臟、胸腺和淋巴結(jié)制備細(xì)胞懸液
實(shí)驗(yàn)材料：
1. RPMI-5或DMEM-5*培養(yǎng)基
2. 新鮮分離的小鼠器官：≤6周齡的小鼠胸腺；6周至6個月齡的小鼠脾臟和淋巴結(jié)
3. 60mm×15mm培養(yǎng)皿
4. 剪刀和鑷子（保存在70%乙醇的燒杯中）
5. 裝有19G針頭的6ml注射器
6. 200μm尼龍濾網(wǎng)
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 將新鮮分離的器官放入盛有3ml RPMI-5或DMEM-5*培養(yǎng)基的60mm×15mm培養(yǎng)皿（每種器官一個培養(yǎng)皿）中，用剪刀將器官剪碎。
2. 用6ml注射器的活塞將組織塊向培養(yǎng)皿底面用力擠壓直至僅剩纖維組織。
3. 用裝有19G針頭的6ml注射器將組織懸液反復(fù)抽吸數(shù)次，以進(jìn)一步粉碎組織團(tuán)塊。
4. 將細(xì)胞懸液通過200μm尼龍濾網(wǎng)濾入離心管中。用約4ml*培養(yǎng)基洗一次培養(yǎng)皿，如需要則重復(fù)一次，之后將洗液通過濾網(wǎng)加入離心管中。
5. 在Sorvall H-1000B離心機(jī)中以1000r/min（200g）離心10min后棄上清（如需要去除紅細(xì)胞和死細(xì)胞，見輔助方案）。用20ml*培養(yǎng)基將沉淀重懸后離心，再以適量培養(yǎng)基重懸以便計數(shù)。
6. 如細(xì)胞不能立即處理，zui好的保存細(xì)胞活力的方法是將細(xì)胞懸液置于冰塊中。這種處理也能減少因細(xì)胞貼壁引起的細(xì)胞損失。
附錄：
RPMI-5*培養(yǎng)基：
RPMI1640培養(yǎng)基（Life Technologies）含有:
5%FBS,56℃熱滅活1h
10mmol/L HEPES
20μg/ml硫酸慶大霉素
50μmol/L 2-ME
過濾除菌