人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細胞是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株IL-2依賴型NK細胞株。NK-92MI細胞是轉(zhuǎn)染得到的源自NK-92細胞的IL-2非依賴的NK細胞株。親本細胞NK-92通過微粒體基因轉(zhuǎn)化法用逆轉(zhuǎn)錄病毒MFG-hIL -2載體攜帶的人IL-2cDNA進行轉(zhuǎn)化?？赡苡捎谳d體整合到基因組DNA中，轉(zhuǎn)化是穩(wěn)定的
一、細胞基本屬性
細胞名稱：人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細胞
細胞別稱 ：NK-92MI; NK-92 M; NK-92 mi; NK92-MI; NK92Ml; NK-92 transfected with MFG-Hil2
細胞貨號：SNL-195
細胞種屬 ：人
生長情況 ：懸浮
培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細胞培養(yǎng)操作
換液周期 ：2-3天
培養(yǎng)基體積 :T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例 :1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）
傳代方法 :
1.混勻細胞，收集細胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；
2.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
3.補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項 :部分懸浮細胞會附著瓶底，輕輕晃動培養(yǎng)基或者吹打細胞面就會脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細胞操作，吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。
三、細胞凍存操作
凍存液配方 :92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格: 200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法 :
1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項:凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案
Tips：
1.細胞增殖偏慢，均為懸浮生長，大部分細胞聚集成團，少數(shù)分散的細胞，并且細胞間隙會有較多的死細胞和細胞碎片。
2.強烈建議選擇尚恩生物NK92-MI專用培養(yǎng)基（貨號SNLM-195）培養(yǎng)。
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