MKN74（人胃癌細(xì)胞）生長偏慢時，可以將血清濃度增加到15-20%培養(yǎng)一段時間，待細(xì)胞狀態(tài)和生長速度恢復(fù)正常后換回10%血清
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱：MKN74（人胃癌細(xì)胞）
細(xì)胞簡稱 ：MKN74
細(xì)胞貨號 ：SNL-176
細(xì)胞種屬： 人
生長情況 ：貼壁
培養(yǎng)條件 ：1640+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境： air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期 :2-3天
培養(yǎng)基體積 :T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例 :1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）
傳代方法 :
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s，吸走潤洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；
5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化；
6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補(bǔ)足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項(xiàng) :不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時間
消化傳代細(xì)胞時吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方 :92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格 :200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法 :
1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng) :凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
Tips：
1.細(xì)胞培養(yǎng)時黑點(diǎn)可能會比較多，具體原因參見培養(yǎng)操作說明2、3條；
我們推薦使用尚恩生物MKN74（人胃癌細(xì)胞）專用*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：SNLM-176）作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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