MDA-MB-453（人乳腺癌細胞）是由RCailleau等在1976年從一位48歲女性腫瘤轉(zhuǎn)移患者胸水中建立的細胞株，其它轉(zhuǎn)移灶包括淋巴結(jié)、腦和胸水及心包腔積水;MDA-MB-453細胞過表達FGF受體。
一、細胞基本屬性
細胞名稱 ：人乳腺癌細胞
細胞別稱 ：MDA-MB-453; MDA-MB 453; MDAMB 453; MDA-MB453; MDAMB453; MDA-453; MDA453; MD Anderson-Metastatic Breast-453
細胞貨號:SNL-056
細胞種屬 :人
生長情況:貼壁
培養(yǎng)條件: L15+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境 :air, 100%
二、細胞培養(yǎng)操作
換液周期 :2-3天
培養(yǎng)基體積 :T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例 :1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）
傳代方法 :
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；
5.消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化；
6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項 :不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。
三、細胞凍存操作
凍存液配方 :92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格 :200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法 :
1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項 :凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案
Tips：
1.L15培養(yǎng)基不需要5%二氧化碳，使用37度培養(yǎng)箱空氣培養(yǎng)即可；
2.細胞生長偏慢，注意控制細胞密度不要過低；
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