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一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱:MCF-10A（人正常乳腺上皮細(xì)胞）
細(xì)胞別稱:MCF 10A; MCF.10A; MCF10A; MCF10a; MCF-10 Attached; Michigan Cancer Foundation-10A
細(xì)胞貨號(hào):SNL-225
細(xì)胞種屬:人
生長(zhǎng)情況:貼壁
培養(yǎng)條件:DM/F12＋5% HS＋20ng/mL EGF＋0.5μg/mL Hydrocortisone＋10μg/mL Insulin＋1% NEAA +1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期:2-3天
培養(yǎng)基體積:T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例:1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）
傳代方法:
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞10-20s，吸走潤(rùn)洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；
5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未*脫落時(shí)加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化；
6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補(bǔ)足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項(xiàng):不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時(shí)間
消化傳代細(xì)胞時(shí)吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格:200-300萬(wàn)/ml，1ml每管
凍存方法:
1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng):凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
Tips：
1.細(xì)胞貼壁偏緊，消化時(shí)間偏長(zhǎng)，注意控制消化時(shí)間避免消化狀態(tài)變差。

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