L6（大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞）是由Yaffe從甲基膽蒽存在下大鼠大腿肌的原代培養(yǎng)物最初兩代中分離得到。L6細(xì)胞在培養(yǎng)基中可融合形成多核的肌管和橫紋肌纖維。L6細(xì)胞融合的程度隨著代數(shù)的增加而下降;因而，L6細(xì)胞應(yīng)冷凍于低代次階段并周期性地重新克隆以選擇融合能力強(qiáng)的細(xì)胞。如果讓培養(yǎng)容器中的細(xì)胞長(zhǎng)滿，L6細(xì)胞的成肌組分將迅速耗盡。
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱：L6（大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞）
細(xì)胞別稱：L6; L-6; L-6 myoblast
細(xì)胞貨號(hào)：SNL-030
細(xì)胞種屬：大鼠
生長(zhǎng)情況：貼壁
培養(yǎng)條件：H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期：2-3天
培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml售后
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）
傳代方法：
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞10-20s，吸走潤(rùn)洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；
5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未*脫落時(shí)加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化；
6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補(bǔ)足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項(xiàng)：不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時(shí)間
消化傳代細(xì)胞時(shí)吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格：200-300萬(wàn)/ml，1ml每管
凍存方法：
1. 離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；
2. 將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng) 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
我們推薦使用尚恩生物L(fēng)6（大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞）*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：SNLM-030）作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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