細 胞 基 本 信 息
▲細胞正常生長形態(tài)照片
細胞名稱：THP-1(人單核細胞白血病細胞)
細胞別稱：THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); Tohoku Hospital Pediatrics-1
細胞貨號: SNL-044
生長特性: 懸浮
培養(yǎng)條件: 1640+10%FBS+0.05mM β-mercaptoethanol+1% P/S
培養(yǎng)環(huán)境: 空氣，95%；二氧化碳 (CO2)，5%
細胞簡介：THP-1細胞從一名1歲的患有急性單核細胞性白血病的男孩的外周血中分離建立，細胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細胞，細胞膜和胞漿內(nèi)均沒有免疫球蛋白，表達C3R和FcR。THP-1細胞可受佛波酯、TPA誘導向單核系方向分化。THP-1細胞可以用于3D細胞培養(yǎng)、免疫系統(tǒng)紊亂、免疫學和毒理學研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。
THP-1細胞培養(yǎng)注意事項
THP-1細胞懸浮圓形生長，偶有小聚團，屬于正?，F(xiàn)象，無需吹散；
圓形透亮、細胞膜完整的細胞是活細胞，如果無法判斷，可以取少量細胞用臺盼藍染色后計數(shù)確定細胞活率；
少量細胞附著瓶底屬于正?，F(xiàn)象，可將懸浮細胞轉(zhuǎn)移至新瓶，丟棄貼壁的細胞；
THP-1喜歡偏酸環(huán)境，培養(yǎng)基呈橘色時可不用換液，補充適量新鮮培養(yǎng)基維持一天再進行換液或傳代操作；
THP-1有密度依賴性，密度低時生長較慢，培養(yǎng)密度維持在30萬-100萬細胞/mL之間為宜，超過80萬細胞/mL即可傳代；
THP-1復蘇后恢復較慢，如無特殊情況，復蘇后48小時內(nèi)不對細胞進行操作；
THP-1生長需要穩(wěn)定的環(huán)境，不頻繁拿出培養(yǎng)箱，不頻繁離心；
培養(yǎng)時瓶子豎立放置（瓶蓋朝上），可增加細胞局部密度，促進細胞增殖。
β-巰基乙醇可以消除活性氧自由基，維持細胞高密度生長。若培養(yǎng)基中不添加β-巰基乙醇，長期培養(yǎng)細胞可能會出現(xiàn)大量貼壁，嚴重聚團等情況。
THP-1 細 胞 換 液 方 法
離心換液法：
1. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預熱）
2. 將所有細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中；
3. 900-1000rpm，3min離心；
4. 棄上清，加5mL PBS輕輕重懸細胞進行潤洗，再900-1000rpm，3min離心；
Tips：此處PBS潤洗是為了去除細胞碎片，平時培養(yǎng)若細胞碎片不多可以忽略此步驟，若碎片偏多，可以重復潤洗2次。
5. 培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；
6. 離心完成后棄上清，加適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細胞沉淀，將細胞懸液接種回培養(yǎng)瓶中，混勻細胞，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
半換液法：
1. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預熱）
2. 將培養(yǎng)瓶豎立靜置一段時間，待細胞沉底；（肉眼觀察細胞沉底情況）
3. 小心吸出一半的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移到離心管；
4. 900-1000rpm 3min離心，離心管里若有細胞，則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶；
5. 原瓶補充一半的新鮮培養(yǎng)基。
Tips：半換液2-3次后需要進行離心換液。
THP-1 細 胞 傳 代 方 法
離心法：
1. 取少量細胞懸液進行計數(shù)確定細胞密度，密度80萬/mL以上傳代，并根據(jù)計數(shù)結(jié)果確定傳代比例；
2. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預熱）
3. 用移液器吸取培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中；
4. 900-1000rpm，3min離心收集細胞；
5. 在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；（T25推薦10mL，T75推薦15mL）
6. 離心完成后，棄離心管內(nèi)上清，然后加入適量新鮮培養(yǎng)基，輕輕重懸吹散細胞，將細胞懸液均勻接種至培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻后將細胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
Tips：懸浮細胞通常都偏脆弱，注意控制吹打力度盡可能輕柔和離心轉(zhuǎn)速以及時間不要過高，避免細胞受機械損傷。
直接分瓶法：
1. 取少量細胞懸液進行計數(shù)確定細胞密度，密度80w/mL以上傳代，并根據(jù)計數(shù)結(jié)果確定傳代比例；
2. 輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使細胞均勻分散；
3. 用移液器吸取培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞懸液，均分到若干個新培養(yǎng)瓶中，每瓶再補充適量的新鮮培養(yǎng)基，輕輕混勻后將細胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
Tips：用直接分瓶法傳代1-2次后需進行離心傳代。
THP-1 細 胞 凍 存 方 法
1. 取少量細胞懸液進行計數(shù)確認細胞密度。
Tips：若凍存前培養(yǎng)基已經(jīng)變黃，先換液靜置培養(yǎng)4h左右，待細胞活力穩(wěn)定后再進行凍存。
2. 準備所需的培養(yǎng)基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無菌槍頭等；（試劑需提前預熱）
3. 根據(jù)收集到細胞量，配制相應量的凍存液，并準備相應數(shù)量的凍存管，在凍存管上標志細胞名稱，代次，凍存時間等信息。推薦凍存液配方：90%FBS+10%DMSO；凍存密度200-300萬細胞/mL/管。
Tips：凍存密度過低將導致復蘇后狀態(tài)不佳。
4. 將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中1000rpm，3min離心收集細胞；
5. 離心完成后棄上清，加入相應量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細胞，將細胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度，不要產(chǎn)生過多氣泡；
Tips：加入凍存液混勻細胞后及時分裝并將細胞降溫凍存，以減少DMSO對細胞的毒性。
6. 將細胞放置程序降溫凍存盒中，再將凍存盒轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱進行降溫凍存。
7. 次日復蘇一管檢查凍存效果，確認沒問題后及時將凍存細胞放置液氮中保存，細胞在-80℃冰箱放置時間不要超過3天。
THP-1 細 胞 復 蘇 方 法
1. 提前將水浴鍋預熱至37℃，培養(yǎng)基復溫至室溫或37℃，離心機設置好轉(zhuǎn)速；
2. 將凍存細胞從液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速搖晃至完*融化，融化時間1min左右；
Tips：若液氮或冰箱距離細胞房較遠，細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。
3. 直接將凍存管900-1000rpm 2min離心，同時在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；
4. 離心完成后棄上清，吸取1mL新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，吹散細胞后接種到培養(yǎng)瓶中；
5. 使用十字法或8字法將細胞混勻后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
Tips：整個細胞復蘇過程在盡可能5-10min內(nèi)完成。
THP-1 細 胞 收 貨 攻 略
1. 拆封包裝盒，確認細胞，說明書等是否齊全，收貨細胞名與所購買細胞是否符合；
2. 觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，有無漏液，培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基是否有肉眼可見的絮狀物或者渾濁等，發(fā)現(xiàn)異常及時拍照聯(lián)系銷售人員；
3. 確認無異常后，將培養(yǎng)瓶表面消毒，然后撕掉封口膜豎立放入培養(yǎng)箱平衡4h左右，讓懸浮細胞沉下培養(yǎng)瓶底部；
4. 平衡過程中可以仔細閱讀細胞說明書，知悉細胞所需培養(yǎng)體系，培養(yǎng)環(huán)境以及培養(yǎng)注意事項等；
5. 平衡完成后豎立取出細胞培養(yǎng)瓶，此時大部分細胞沉在培養(yǎng)瓶底部，小心吸取上清至離心管中，保留10mL左右培養(yǎng)基在培養(yǎng)瓶內(nèi)，小心操作，盡量不要吸到沉在底部的細胞；
6. 將離心管1200rpm，5min離心收集未沉下培養(yǎng)瓶底部的細胞，上清可以4℃保存，后續(xù)用于培養(yǎng)細胞，以平穩(wěn)過度到自己的培養(yǎng)基。將收集到的細胞接種至原培養(yǎng)瓶；
7. 輕輕混勻細胞，取100-200ul細胞懸液進行計數(shù)，根據(jù)計數(shù)結(jié)果調(diào)整細胞培養(yǎng)密度。然后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
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