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多肽蛋白分析在使用時需要注意哪些
閱讀：654 發(fā)布時間：2023-1-31
多肽蛋白分析產品實例：脫氫睪丸激素、腺(嘌呤核)苷、縮二氨酸、抗菌素、糖肽、人胰生長激素、胰蛋白酶抑制劑、β-乳球蛋白、尿酸、免疫球蛋白、類葉紅素、人胰島素B鏈、賴氨酸、蘇氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等產品的分離純化。
多肽蛋白分析會遇到的問題：
1、多肽樣品在新的硅膠基質色譜柱上不出峰或者峰面積異常小，這是為什么？
這是因為全多孔球形硅膠柱上的非特異吸附位點對多肽產生死吸附從而導致不出峰。
色譜柱中非特異性吸附位點主要來源于殘留的硅醇基、硅膠中的殘留重金屬、鍵合相脫落后暴露的硅羥基，柱管內壁沒有被鈍化的位點。這些都會對多肽樣品有較強的非特異性吸附。
其實在開始使用新色譜柱時，對生物樣品這樣的非特異性吸附會比較嚴重，可以對色譜柱進行高濃度樣品飽和處理。在正式檢測前預*樣，使樣品在柱子上累積，覆蓋住這樣的位點，才會使我們以后的分析有好的色譜圖。建議隔一分鐘進一次樣，連續(xù)進十幾針，用過量樣品覆蓋掉非特異性吸附位點。等峰面積，峰形穩(wěn)定后就可以正式檢測樣品。
2、檢驗多肽的色譜柱出現(xiàn)柱壓升高，柱效下降該如何解決？
日常對色譜柱沖洗維護可以遵循色譜柱出廠說明書，但是在分析多肽等蛋白質樣品時還容易出現(xiàn)一種現(xiàn)象：蛋白污染。主要是柱頭端填料出現(xiàn)結塊，如果出現(xiàn)蛋白污染，建議使用乙腈-水-三fu乙酸 = 50-50-0.1小流速反向沖洗60倍柱體積或者反向沖洗過夜。