XL10-Gold化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86014-01(10×100ul)/BFNC86014-02(50×100ul)

XL10-Gold：                                              100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月）

基因型

Tet^R Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F? proAB lacI^qZΔM15 Tn10 (Tet^R) Amy Cam^R]

產(chǎn)品說明

XL10-Gold是目前轉(zhuǎn)化效率極高的感受態(tài)細(xì)胞，由Stratagene開發(fā)的特異性用于大質(zhì)?；蛘滟F連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化或構(gòu)建文庫的超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞。XL10-Gold菌株為Hte(high transformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene開發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力的宿主菌基因型，已成功應(yīng)用于40kd質(zhì)粒的構(gòu)建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統(tǒng)；同時(shí)缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；Tet^R， Cam^R賦予菌株四環(huán)素和氯霉素抗性；lacI^qZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍(lán)、白斑篩選。

青旗生物生產(chǎn)的XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>2×10⁹ cfu/μg DNA。

常規(guī)操作方法

1. XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手bo打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激35秒（非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for<30 seconds="" or="" for="">40 seconds.），迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

XL10-Gold化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞適宜在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率?；烊胭|(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. XL10-Gold菌株對(duì) <40 µg/ml氯霉素有抗性，但對(duì)100 µg/ml氯霉素敏感。

5.XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方法，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)2×10⁹ cfu/μg DNA；如果有更高要求，可嘗試Stratagene公司推薦的標(biāo)準(zhǔn)protocol。