核糖體提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1804

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

核糖體是細(xì)胞內(nèi)一種核糖核蛋白顆粒(ribonucleoprotein particle)，主要由RNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成，其惟一功能是按照mRNA的指令將氨基酸合成蛋白質(zhì)多肽鏈，所以核糖體是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的分子機(jī)器。核糖體無(wú)膜結(jié)構(gòu)，主要由蛋白質(zhì)(40%)和RNA(60%)構(gòu)成.核糖體按沉降系數(shù)分為兩類(lèi)，一類(lèi)存在于細(xì)菌等原核生物中，另一類(lèi)存在于真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。他們有的漂浮在細(xì)胞內(nèi)，有的結(jié)集在一起。

核糖體提取試劑盒可用于各種動(dòng)物細(xì)胞和實(shí)體軟、硬組織樣本的核糖體的提取。

本試劑僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

產(chǎn)品組成：

自備儀器和試劑耗材：
儀器：離心機(jī)、渦旋混勻器、Dounce勻漿器、移液器、冰箱、冰盒
耗材：離心管、吸頭
試劑：PBS(pH7.4，實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)，也可用HBSS

使用方法：
使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3. 最好使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒(méi)有Dounce勻漿器，用普通1ml玻璃勻漿器勻漿也可。

細(xì)胞核糖體提取：

1. 取1-2×10⁷個(gè)細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞；

2. 用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】：在500g條件下離心5分鐘。

3. 加入500μl-1ml冷的試劑A，置冰上10分鐘。

4. 用Dounce勻漿器勻漿30-40下。

5. 將勻漿液在4℃，1000g力條件下離心5分鐘。棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在4℃，20000g力條件下離心10分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在4℃，100000g力條件下離心60分鐘。棄上清，收集沉淀。
【注】：如果條件允許，可將離心時(shí)間延長(zhǎng)到24小時(shí)。

8. 在沉淀中加入400μl冷的試劑B，混勻。

9. 在4℃，100000g 力條件下離心60分鐘。
【注】：如果條件允許，可將離心時(shí)間延長(zhǎng)到24小時(shí)。

10. 棄上清，沉淀用核糖體保存液重懸。

11. 即得到核糖體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

組織核糖體提取：

1. 取50-100mg 鮮動(dòng)物組織樣本，用PBS洗滌干凈。

2. 用剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。
【注】：在500g條件下離心5分鐘。

3. 加入500μl-1ml冷的試劑A，置冰上10分鐘。

4. 用Dounce勻漿器充分勻漿30-40下，至無(wú)明顯固體團(tuán)塊。然后在4℃，1000g力條件下離心5分鐘。

5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。

6. 在4℃，20000g力條件下離心10分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在4℃，100000g力條件下離心60分鐘。棄上清，收集沉淀。
【注】：如果條件允許，可將離心時(shí)間延長(zhǎng)到24小時(shí)。

8. 在沉淀中加入400μl冷的試劑B，混勻。

9. 在4℃，100000g力條件下離心60分鐘。
【注】：如果條件允許，可將離心時(shí)間延長(zhǎng)到24小時(shí)。

10. 棄上清，沉淀用核糖體保存液重懸。

11. 即得到核糖體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

保存條件：2-8℃，12個(gè)月有效。