γ-谷氨酰轉肽酶（γ-GT）檢測試劑盒（比色法）

產(chǎn)品貨號：BA1790

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

檢測原理：

γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關鍵酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨?；D移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?；衔锏乃?，產(chǎn)生谷氨酸鹽，在細胞外谷胱甘肽新陳代謝中起了重要的作用。

γ-GT催化谷氨酰對硝基苯胺中γ-谷氨酰基轉移給N-甘氨酰甘氨酸，生成對硝基苯胺，在405nm有特征光吸收；通過測定405nm光吸收增加速率，來計算γ-GT酶活性。

試劑組成：

需要而未提供的試劑和器材： 

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

樣本處理：

1. 細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；10000rpm 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2. 組織：稱取約0.1g樣品，加提取液1.0 mL充分研磨，于4℃，10000rpm離心15min，取上清液待測。

3. 血清（漿）：直接檢測。

操作步驟： 

※正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

1. 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至405nm，蒸餾水調零。

2. 試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）水浴中預熱30min以上（保證無沉淀）。

3. 按順序加入下列試劑，完成測定。

活性計算： 

1. γ-GT活性計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：

活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對硝基苯胺為一個活性單位。

γ-GT（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×10⁶×V反總÷（Cpr×V樣）÷T=0.506×ΔA÷Cpr

（2）按樣本質量計算：

活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對硝基苯胺為一個活性單位。

γ-GT（U/g 質量）=ΔA÷（ε×d）×10⁶×V反總÷（W÷V提取×V樣）÷T=0.506×ΔA÷W

（3）按血清（漿）計算：

活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對硝基苯胺為一個活性單位。

γ-GT（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×10⁶×V反總÷V樣÷T=0.506×ΔA

（4）按細菌或培養(yǎng)細胞計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對硝基苯胺為一個活性單位。

γ-GT（U/10⁴cell）=ΔA÷（ε×d）×10⁶÷(500×V樣÷V提取) ÷T=0.001×ΔA

V樣：加入樣品體積，0.1mL；V提?。杭尤胩崛∫后w積：1mL；T：反應時間，2min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：500萬細胞；ε：對硝基苯胺消光系數(shù)，9870L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應體系總體積，0.001L；10⁶：單位換算系數(shù)，1mol=10⁶μmol

注意事項：

1. 培養(yǎng)細胞中γ-GT活性測定時，細胞中γ-GT的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞（防止因為蛋白質變性導致酶失活）。