超氧陰離子自由基檢測(cè)試劑盒(磺胺比色法)

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1541

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂 質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞， 與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。 生物體內(nèi)的分子氧可以經(jīng)過(guò)單電子還原轉(zhuǎn)變?yōu)槌蹶庪x子自由基(O2-)，超氧陰離子自由基 既可以直接作用于蛋白質(zhì)和核酸等大分子，也可以衍生為羥自由基、單線態(tài)氧、過(guò)氧化氫及 脂質(zhì)過(guò)氧物自由基等對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能具有破壞作用的活性氧。

超氧陰離子自由基檢測(cè)試劑盒(磺胺比色法)又稱超氧陰離子清除能力檢測(cè)試劑盒，其檢測(cè)原理是利用羥胺氧化的方法可以檢測(cè)生物體系中超氧陰離子自由基(O2-)，即 超氧陰離子自由基(O2-)與羥胺反應(yīng)生成NO2-，NO2-在氨基苯磺酸和萘胺作用下反應(yīng)生成粉 紅色的偶氮物質(zhì)對(duì)-苯磺酸-萘胺，以分光光度計(jì)測(cè)定530nm處吸光度，在一定范圍內(nèi)顏色 深淺與超氧陰離子自由基(O2-)成正比，根據(jù)NO2-反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線將A₅₃₀換算成NO2-濃度， 再依據(jù)上述關(guān)系式即可計(jì)算出O2-濃度，該試劑盒主要用于測(cè)定植物組織中的超氧陰離子自 由基含量或超氧陰離子清除能力。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、蒸餾水。

2、實(shí)驗(yàn)材料：植物組織(大豆、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等。

3、研缽或勻漿器。

4、離心管或試管。

5、低溫離心機(jī)。

6、恒溫箱或水浴鍋。

7、比色杯。

8、分光光度計(jì)。

操作步驟：（僅供參考）

1、準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取正常或逆境下的新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取1~1.5g，加入2ml預(yù)冷的O2- Lysis buffer后冰浴條件下勻漿或研磨，4℃ 10000g 離心10min，上清液即為超氧陰離子自由基提取液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，4℃保存，用于超氧陰離子自由基的檢測(cè)。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的超氧陰離子自由基，可以使用O2 - Lysis buffer進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、配制系列NO2-標(biāo)準(zhǔn)溶液：取出NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM)恢復(fù)至室溫后，NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM)按下表繼續(xù)稀釋：

3、O2-加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的超氧陰離子自由基濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管。

4、O2-測(cè)定：以空白調(diào)零，比色杯光徑1cm，分光光度計(jì)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管530nm處吸光度(即為A標(biāo)準(zhǔn)、A測(cè)定)。

計(jì)算：

以系列NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1~6號(hào))含量(μM)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測(cè)定管的吸光度進(jìn)而計(jì)算NO2-含量。根據(jù)如下公式計(jì)算具體樣品中超氧陰離子自由基(O2-)的含量：

植物組織樣品 O2-(μM/g)=2×n×VT/(W×VS)

式中：2=NO2-與 O2-間的化學(xué)計(jì)量數(shù)；

n=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的NO2-含量(μM) VT=超氧陰離子自由基提取液總體積(ml) W=樣品鮮重(g) VS=測(cè)定時(shí)加入提取液體積(ml)

血清、尿液等樣品O2-(μM/ml)=2×n×N/VS

式中：2=NO2-與O2-間的化學(xué)計(jì)量數(shù)

n=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的 NO2-含量(μM) N=稀釋倍數(shù)VS=測(cè)定時(shí)加入提取液體積(ml)

注意事項(xiàng) ：

1、 實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于4℃。

2、 如果樣品中含有較多的葉綠素，會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果，可在加入羥胺溶液25℃水浴孵育20min后用等體積yi醚萃取葉綠素，再行顯色反應(yīng)。

3、 如果沒(méi)有分光光度計(jì)，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測(cè)定，但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的最大檢測(cè)體 積。

4、 所測(cè)樣本的濃度過(guò)高，應(yīng)用O2- Lysis buffer 稀釋樣品后重新測(cè)定。

有效期：6個(gè)月有效，4℃運(yùn)輸，4℃保存。