谷丙轉氨酶（GPT）活性檢測試劑盒（微量法）

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

產品貨號：BA1112

產品規(guī)格：100管/48樣

產品簡介：

GPT（EC 2.6.1.2）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化氨基酸和酮酸轉氨基反應，在氨基酸代謝中具有重要作用。此外，哺乳動物肝細胞GPT活性很高，當肝細胞壞死，GPT釋放到血液中，血清GPT活性顯著增高。因此，GPT被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測指標。

GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸發(fā)生轉氨基反應，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不僅終止上述反應，而且與酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在堿性條件下呈紅棕色，可以在505nm讀取吸光值

并計算酶活力。

產品內容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體4mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體3.5 mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體30 mL×1瓶，4℃保存；

標準品：液體1mL×1支，20µmol/mL丙酮酸鈉標準品，4℃保存。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸水。

操作步驟：

一、樣品測定的準備

1、 細胞或細菌的制備 ：

先收集細胞或細菌樣品到離心管內，棄上清，按照每500萬細胞或細菌加入1mL提取液，超聲波破碎細胞或細菌（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）。3500g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進冰浴行勻漿。3500g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

二、測定步驟

1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至505nm，蒸餾水調零。

2、 標準曲線的測定

首先將標準品稀釋至2µmol/mL，按下表混合標準品和試劑一得到濃度梯度標準管：

3．在EP管或在96孔板中加入下列試劑

注:0µmol/mL標準管為空白管。

三、計算公式：

1、標準曲線的繪制：

以各標準溶液濃度為x軸，以?A（A標準管-A空白管）為y軸做標準曲線，得到方程y=kx+b。將（A測定管-A對照管）帶入方程求x值。

2、GPT活性計算：

（1）按樣本鮮重計算：

單位定義：每小時每g樣品催化產生1µmol丙酮酸的量為一個GPT活力單位。

GPT（U/g鮮重）=x×（V樣本+V試劑一）÷（W×V樣本÷V樣總）÷T=12x÷W。

（2）按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每小時每mg組織蛋白催化產生1µmol丙酮酸的量為一個GPT活力單位。

GPT（U/mg prot）=x×（V樣本+V試劑一）÷（Cpr×V樣本）÷T=12x÷Cpr。

（3）按血清（漿）體積計算：

單位定義：每小時每mL血清（漿）樣品催化產生1µmol丙酮酸的量為一個GPT活力單位。

GPT（U/mL）=x×（V樣本+V試劑一）÷V樣本÷T=12x。

（4）按細胞或細菌數量計算：

單位定義：每小時每10⁴個細胞或細菌催化產生1µmol丙酮酸的量為一個GPT活力單位。

GPT（U/10⁴ cell）=x×（V樣本+V試劑一）÷（500×V樣本÷V樣總）÷T=0.024x。

V樣本：樣本體積，0.005mL；V試劑一：試劑一體積，0.025mL；V樣總：提取液體積，1mL；W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；T：反應時間，0.5h；500：細胞或細菌總數，萬。