果膠酶檢測(cè)試劑盒（DNS微板法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1545

產(chǎn)品規(guī)格：100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

天然果膠類(lèi)物質(zhì)以原果膠、果膠(Pectin)、果膠酸的形態(tài)廣泛存在于植物的果實(shí)、根、莖、葉中，是細(xì)胞壁的一種組成成分，它們伴隨纖維素而存在，構(gòu)成相鄰細(xì)胞中間層粘結(jié)物，使植物組織細(xì)胞緊緊黏結(jié)在一起。果膠酶(Pectinase)是一類(lèi)分解果膠質(zhì)酶類(lèi)的總稱，實(shí)質(zhì)是多聚半乳糖醛酸水解酶，包括原果膠酶，果膠酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類(lèi)，廣泛存在于植物果實(shí)和微生物中，主要用于食品、釀酒、環(huán)保、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè)。

果膠酶檢測(cè)試劑盒(DNS微板法)檢測(cè)原理是果膠酶水解果膠生成β-半乳糖醛酸，通過(guò)二硝基水楊酸(DNS)與反應(yīng)形成紫紅色的化合物，該化合物呈色強(qiáng)度與半乳糖醛酸濃度成正比，于酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，計(jì)算出樣品中果膠酶活性。該試劑盒主要用于定量檢測(cè)植物組織或果實(shí)中果膠酶，反應(yīng)顏色越深，吸光度越大，果膠酶的活性越強(qiáng)。該100T試劑盒可以檢測(cè)約95-98次樣本。該試盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水

2.        實(shí)驗(yàn)材料：桃子、李子、蘋(píng)果、杏等果實(shí)或其他植物組織

3.        研缽或勻漿器

4.        離心管或試管

5.        離心機(jī)

6.        水浴鍋

7.        96孔板

8.        酶標(biāo)儀

操作步驟：

1.        果膠酶提取：取果實(shí)或其他植物組織，洗凈，擦干，稱取剪碎的新鮮樣品，置于提前4℃預(yù)冷的研缽或勻漿器，加入預(yù)冷的Pectinase Lysis buffer，充分研磨或勻漿后轉(zhuǎn)入離心管或試管，離心。留取上清液，即為果膠酶提取液，保存待用。

2.        稀釋果膠標(biāo)準(zhǔn)溶液：取適量的果膠標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，按下表進(jìn)行稀釋：

3.        加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、對(duì)照管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡，小心混勻。如果樣品中的果膠酶活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管，求平均值。

4.        測(cè)定：沸水浴，自來(lái)水中將離心管或試管冷卻至室溫，以蒸餾水稀釋，混勻。取上述空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管中溶液，加至96孔板的孔中，用酶標(biāo)儀以空白調(diào)零，測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)孔、對(duì)照孔、測(cè)定孔在吸光度。

計(jì)算：

以1-5號(hào)管系列果膠標(biāo)準(zhǔn)(4、8、12、16、20μg)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接計(jì)算直線回歸方程。以測(cè)定孔吸光度減去對(duì)照孔吸光度的差值作為測(cè)定吸光度值(A_測(cè)定)，帶入回歸方程求得的定管果膠酶含量，根據(jù)下述公式計(jì)算其活性：

組織樣品的果膠酶活性（μg/hg）=（m×v）/（W×t×V_S）

式中：m=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的測(cè)定管果膠酶含量（μg）

V=果膠酶提取液總體積（ml）

W=樣品鮮重（g）

t=37℃水浴時(shí)間（h）=1

V_S=測(cè)定時(shí)所取果膠酶提取液的體積（ml）=0.2

液體樣品的果膠酶活性(μg/h·ml)=m×N/V

式中：m=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的測(cè)定管果膠酶含量(μg)

N=稀釋倍數(shù)

V=測(cè)定時(shí)所取果膠酶提取液的體積(ml)=0.2

注意事項(xiàng)：

1.        取樣量、試劑用量應(yīng)根據(jù)果膠含量適當(dāng)調(diào)整。?

2.        可溶性糖對(duì)測(cè)定結(jié)果有較大影響，應(yīng)*去除樣品中的可溶性糖。

3.        Pectinase?Lysis?buffer應(yīng)密閉避光保存，避免有效成分揮發(fā)。?

4.        如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)考慮分光光度計(jì)的最小檢測(cè)體積。?

5.        為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6個(gè)月有效。