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濾紙酶檢測(cè)試劑盒(微量法)

參  考  價(jià):面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)

    BA1203-100

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠(chǎng)商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

更新時(shí)間:2021-11-22 17:07:09瀏覽次數(shù):170次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50管/24樣
貨號(hào) BA1203-100 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
濾紙酶檢測(cè)試劑盒(微量法)
纖維素酶是由微生物產(chǎn)生的多組分的酶系,能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖,研究濾紙酶活力對(duì)纖維素酶的研究具有非常重要的意義。

濾紙酶檢測(cè)試劑盒(微量法)

注意:正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品貨號(hào):BA1203

產(chǎn)品規(guī)格:100/48

測(cè)定意義:

纖維素酶是由微生物產(chǎn)生的多組分的酶系,能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖,研究濾紙酶活力對(duì)纖維素酶的研究具有非常重要的意義。

測(cè)定原理:

濾紙酶水解濾紙產(chǎn)生的還原糖能與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色氨基化合物,在540nm處有最大光吸收,在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液顏色深淺與還原糖的量成正比,可測(cè)定計(jì)算得濾紙酶的活力。

產(chǎn)品內(nèi)容:

試劑一:液體25mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體40mL×1瓶,4℃保存。

濾紙條:50mg×50條。

需自備的儀器和用品:

天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

酶液提?。?/span>

1.  組織:按照質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)15~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g,加入1mL蒸餾水)加入蒸餾水,冰浴勻漿后于4℃,12000rpm離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

2.  細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):蒸餾水體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后4℃,12000rpm離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

3.  培養(yǎng)液或其它液體:直接檢測(cè)。

測(cè)定操作:

1.  根據(jù)樣本數(shù)量取兩倍數(shù)量的濾紙條和Ep管,每支Ep管中放入一個(gè)卷狀濾紙條(注意要放入底部),作為底物。2.  對(duì)照管:取200μL滅活的酶液,加入500μL試劑一,充分混勻,再加入放有濾紙條的Ep管中,標(biāo)注為對(duì)照管。3.  測(cè)定管:取200μL酶液,加入500μL試劑一,充分混勻,再加入放有濾紙條的Ep管中,標(biāo)注為測(cè)定管。

4.  對(duì)照管和測(cè)定管同時(shí)置于50℃水浴鍋中反應(yīng)30min

5.  加入800μL試劑二,沸水浴5min,自來(lái)水冷卻后取200μL于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定540nm處吸光值,分別記為A對(duì)照管和A測(cè)定管,△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。

酶活性計(jì)算公式:

a.     用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):y=0.2805x-0.0255,R2=0.9991

(1)按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每毫克蛋白每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPAU/mg prot=△A+0.0255÷0.2805×V反總÷V×Cpr÷T

=0.891×△A+0.0255÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每克組織每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPAU/g=△A+0.0255÷0.2805×V反總÷W×V÷V樣總)÷T

=0.891×△A+0.0255÷W

(3)按液體體積計(jì)算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPAU/mL=△A+0.0255÷0.2805×V反總÷V÷T

=0.891×△A+0.0255

(4)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義:在50℃pH4.6條件下,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPAU/104cell=△A+0.0255÷0.2805×V反總÷V×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))÷V樣總)÷T

=0.891×△A+0.0255÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))

V反總:反應(yīng)總體積,1.5mL,V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.2mLV樣總:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min

b.     96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):y=0.1403x-0.0255,R2=0.9991

(1)按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每毫克蛋白每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPAU/mg prot=△A+0.0255÷0.1403×V反總÷V×Cpr÷T

=1.782×△A+0.0255÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義:在50℃pH4.6條件下,每克組織每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPAU/g=△A+0.0255÷0.1403×V反總÷W×V÷V樣總)÷T

=1.782×△A+0.0255÷W

(3)按液體體積計(jì)算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPAU/mL=△A+0.0255÷0.1403×V反總÷V÷T

=1.782×△A+0.0255

(4)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPAU/104cell=△A+0.0255÷0.1403×V反總÷V×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))÷V樣總)÷T

=1.782×△A+0.0255÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))

V反總:反應(yīng)總體積,1.5mLV樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.2mL;V樣總:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min

注意事項(xiàng):

1.  用干凈的鑷子取出濾紙條,帶手套卷成卷放入Ep管底部。

2.  樣本滅活時(shí)保證同一批樣本處理時(shí)間一致,建議沸水浴十分鐘。

3.  批量樣本測(cè)定之前先做1-2個(gè)樣本的預(yù)實(shí)驗(yàn),若吸光值超過(guò)1.2,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

顯色后取檢測(cè)液時(shí)注意槍頭不要碰到濾紙條,以免帶入毛狀物,影響測(cè)定結(jié)果。


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