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濾紙酶檢測試劑盒(微量法)

參  考  價:面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 型號

    BA1203-100

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

更新時間:2021-11-22 17:07:09瀏覽次數:186次

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供貨周期 現貨 規(guī)格 50管/24樣
貨號 BA1203-100 應用領域 化工,生物產業(yè)
濾紙酶檢測試劑盒(微量法)
纖維素酶是由微生物產生的多組分的酶系,能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖,研究濾紙酶活力對纖維素酶的研究具有非常重要的意義。

濾紙酶檢測試劑盒(微量法)

注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

產品貨號:BA1203

產品規(guī)格:100/48

測定意義:

纖維素酶是由微生物產生的多組分的酶系,能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖,研究濾紙酶活力對纖維素酶的研究具有非常重要的意義。

測定原理:

濾紙酶水解濾紙產生的還原糖能與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色氨基化合物,在540nm處有最大光吸收,在一定范圍內反應液顏色深淺與還原糖的量成正比,可測定計算得濾紙酶的活力。

產品內容:

試劑一:液體25mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體40mL×1瓶,4℃保存。

濾紙條:50mg×50條。

需自備的儀器和用品:

天平、研缽、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

酶液提?。?/span>

1.  組織:按照質量(g):蒸餾水體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL蒸餾水)加入蒸餾水,冰浴勻漿后于4℃,12000rpm離心10min,取上清置于冰上待測。

2.  細胞:按照細胞數量(104個):蒸餾水體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,12000rpm離心10min,取上清置于冰上待測。

3.  培養(yǎng)液或其它液體:直接檢測。

測定操作:

1.  根據樣本數量取兩倍數量的濾紙條和Ep管,每支Ep管中放入一個卷狀濾紙條(注意要放入底部),作為底物。2.  對照管:取200μL滅活的酶液,加入500μL試劑一,充分混勻,再加入放有濾紙條的Ep管中,標注為對照管。3.  測定管:取200μL酶液,加入500μL試劑一,充分混勻,再加入放有濾紙條的Ep管中,標注為測定管。

4.  對照管和測定管同時置于50℃水浴鍋中反應30min

5.  加入800μL試劑二,沸水浴5min,自來水冷卻后取200μL于微量石英比色皿/96孔板中測定540nm處吸光值,分別記為A對照管和A測定管,△A=A測定管-A對照管。

酶活性計算公式:

a.     用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線:y=0.2805x-0.0255,R2=0.9991

(1)按照蛋白濃度計算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每毫克蛋白每分鐘分解濾紙產生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。

FPAU/mg prot=△A+0.0255÷0.2805×V反總÷V×Cpr÷T

=0.891×△A+0.0255÷Cpr

(2)按照樣本質量計算

酶活性定義:在50℃pH4.6條件下,每克組織每分鐘分解濾紙產生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。

FPAU/g=△A+0.0255÷0.2805×V反總÷W×V÷V樣總)÷T

=0.891×△A+0.0255÷W

(3)按液體體積計算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解濾紙產生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。

FPAU/mL=△A+0.0255÷0.2805×V反總÷V÷T

=0.891×△A+0.0255

(4)按細胞數量計算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每104個細胞每分鐘分解濾紙產生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。

FPAU/104cell=△A+0.0255÷0.2805×V反總÷V×細胞數量(萬個)÷V樣總)÷T

=0.891×△A+0.0255÷細胞數量(萬個)

V反總:反應總體積,1.5mL,V樣:反應體系中加入樣本體積,0.2mL;V樣總:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,30min

b.     96孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y=0.1403x-0.0255,R2=0.9991

(1)按照蛋白濃度計算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每毫克蛋白每分鐘分解濾紙產生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。

FPAU/mg prot=△A+0.0255÷0.1403×V反總÷V×Cpr÷T

=1.782×△A+0.0255÷Cpr

(2)按照樣本質量計算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每克組織每分鐘分解濾紙產生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。

FPAU/g=△A+0.0255÷0.1403×V反總÷W×V÷V樣總)÷T

=1.782×△A+0.0255÷W

(3)按液體體積計算

酶活性定義:在50℃pH4.6條件下,每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解濾紙產生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。

FPAU/mL=△A+0.0255÷0.1403×V反總÷V÷T

=1.782×△A+0.0255

(4)按細胞數量計算

酶活性定義:在50℃,pH4.6條件下,每104個細胞每分鐘分解濾紙產生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。

FPAU/104cell=△A+0.0255÷0.1403×V反總÷V×細胞數量(萬個)÷V樣總)÷T

=1.782×△A+0.0255÷細胞數量(萬個)

V反總:反應總體積,1.5mL,V樣:反應體系中加入樣本體積,0.2mLV樣總:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mLW:樣本質量,g;T:反應時間,30min

注意事項:

1.  用干凈的鑷子取出濾紙條,帶手套卷成卷放入Ep管底部。

2.  樣本滅活時保證同一批樣本處理時間一致,建議沸水浴十分鐘。

3.  批量樣本測定之前先做1-2個樣本的預實驗,若吸光值超過1.2,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定,計算公式中乘以稀釋倍數。

顯色后取檢測液時注意槍頭不要碰到濾紙條,以免帶入毛狀物,影響測定結果。


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