木質素過氧化物酶（Lip）檢測試劑盒 （紫外分光光度法）

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

產品貨號：BA1214

產品規(guī)格：50管/48樣

產品簡介：

木質素過氧化物酶（EC1.11.1.14）是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶，屬于木質素降解酶系，在木質素生物降解、造紙工業(yè)、紡織工業(yè)、芳香化合物轉化與降解及環(huán)境污染控制等方面具有較大的應用潛力。木質素過氧化物酶氧化藜蘆醇生成藜蘆醛，在310nm處有特征吸收峰。

產品內容：

試劑一：液體80mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體5mL×1瓶，4℃保存。

需自備的儀器和用品：

天平、研缽、低溫離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿。

操作步驟：

一、酶液提取

1. 組織：按照質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。

2. 細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測。

二、測定操作

三、酶活計算公式

1.  按照蛋白濃度計算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活力單位。

LiP活性（nmol/min/mgprot）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=215×△A÷Cpr

2. 按照樣本質量計算

酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活力單位。

LiP活性（nmol/min/g）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=215×△A÷W

3. 按照細胞數(shù)量計算

酶活性定義：每10⁴個細胞每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活力單位。

LiP活性（nmol/min/10⁴cell）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總）÷T=215×△A÷細胞數(shù)量

4. 按照液體體積計算

酶活性定義：每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活力單位。

LiP活性（nmol/min/L）=△A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T=2.15×10⁵×△A

ε：藜蘆醛摩爾消光系數(shù)：9300L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體積，1mL；V樣：反應中樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，5min。