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BA1212-50
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上海市
更新時間:2021-11-22 16:59:36瀏覽次數(shù):258次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50管/48樣 |
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貨號 | BA1212-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
糜蛋白酶活性檢測試劑盒(紫外分光光度法)
注意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
產(chǎn)品貨號:BA1212
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
產(chǎn)品說明:
糜蛋白酶,又稱胰凝乳蛋白酶,是胰腺分泌的一種蛋白水解酶,能迅速分解變性蛋白質(zhì)。糜蛋白酶的功能與胰蛋白酶相似,但是具有分解能力強、毒性低和不良反應(yīng)小等優(yōu)點。臨床上糜蛋白酶用于痰液稀化,對膿性和非膿性痰液均有效;也用于創(chuàng)傷或手術(shù)后傷口愈合,如白內(nèi)障摘除。
糜蛋白酶催化 BTEE 水解,產(chǎn)物在256nm有特征光吸收;通過測定256nm光吸收增加速率,來計算糜蛋白酶活性。
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前溶于4mL甲醇中,再用水定容至25mL??煞盅b后-20保存,避免反復凍融。
試劑三:液體5mL×1瓶,4℃保存。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、 1mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提取
(1)組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)1:5-10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一
進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清即粗酶液。
(2)血清(漿):直接檢測。
二、測定操作:
1. 紫外分光光度計預熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長到256nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一置于25℃水浴中保溫30min。
3. 操作表:
試劑名稱(μL) | 測定管 |
試劑一 | 450 |
試劑二 | 450 |
試劑三 | 100 |
樣品 | 100 |
將上述試劑分別加入1mL石英比色皿后充分混勻,于256nm處測定初始吸光值A1,然后迅速將比色皿連同反應(yīng)液放入25℃水浴鍋中水浴3min,然后迅速拿出擦干測定3min的吸光A2,計算△A=A2-A1。
三、糜蛋白酶活性計算公式:
(1) 按蛋白濃度計算
活性單位定義:25℃每毫克蛋白每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位。
糜蛋白酶活(U/mg prot)= (△A×V反總÷ε÷d)÷(Cpr×V樣)÷T=3.8×△A÷Cpr。
(2) 按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義:25℃每克樣品每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位。
糜蛋白酶活(U/g 鮮重)=(△A×V反總÷ε÷d)÷(W×V樣÷V提取)÷T=3.8×△A÷W。
(3) 按血清(漿)體積計算
活性單位定義:25℃每毫升血清(漿)每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位。
糜蛋白酶活(U/mL )=(△A×V反總÷ε÷d)÷V樣÷T=3.8×△A。
V樣:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積,0.02mL;Cpr:粗酶液蛋白濃度,mg/mL,需要另外測定;W:樣本鮮重,g;V反總:反應(yīng)總體積,0.22 mL;V提?。杭尤胩崛∫后w積,1mL;T:反應(yīng)時間,3 min;ε:BTEE消光系數(shù):0.964 mL/μmol/cm;d:比色皿光徑,1cm。
注意事項:
1. 當△A大于0.2或者吸光值大于1時,建議將樣品稀釋后測定。
2. 當△A小于0.03時,建議將樣品濃縮或者增加樣品體積進行測定,注意計算公式除以濃縮倍數(shù)或者改變體積。
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