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BA1243-100
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更新時(shí)間:2021-11-22 16:48:31瀏覽次數(shù):208次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/48樣 |
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貨號(hào) | BA1243-100 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
尿素氮(BUN)含量檢測(cè)試劑盒(微量法)
注意:正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
尿素(BUN)是人體蛋白質(zhì)代謝的主要終末產(chǎn)物,BUN構(gòu)成了血液中絕大部分的非蛋白質(zhì)氮,血液尿素氮是腎功能的主要指標(biāo)之一。用靛酚藍(lán)比色法測(cè)定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH3-N,生成的藍(lán)色靛酚和尿素氮的濃度成正比。
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:粉劑×2瓶,4℃避光保存,臨用前加2mL蒸餾水充分溶解。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑三A液:液體20mL×1支,4℃保存;
試劑三B液:液體20mL×1瓶,4℃保存;
將AB溶液保存在冰箱中。使用前將2溶液各20毫升混合,用蒸餾水稀釋至100毫升。
試劑四:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1瓶,4℃保存。10mg尿素。臨用前加入4.66mL蒸餾水配制成1mg/mL尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、研缽/勻漿器、低溫離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
操作步驟:
一、樣品處理
1、組織:按照質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5-10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL蒸餾水),冰上勻漿后于4℃,13000g離心15min,取上清待測(cè)。
2、細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):蒸餾水體積(mL)為500-1000:1的比例(建議500萬個(gè)細(xì)胞加入1mL蒸餾水),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3s,間隔7s,總時(shí)間3min);然后4℃,13000g離心15min,取上清置于冰上待測(cè)。
3、血清(漿)或其它液體:直接檢測(cè)。
二、測(cè)定操作:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,波長(zhǎng)調(diào)至630nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
2、將1mg/mL尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋至50μg/mL備用。
3、加樣表:
試劑名稱(μL) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
樣本 | 30 | 30 | ||
標(biāo)準(zhǔn)品 | 30 | |||
蒸餾水 | 30 | 24 | ||
試劑一 | 60 | 60 | 60 | |
試劑二 | 110 | 110 | 110 | 110 |
充分混勻,于37℃反應(yīng)10min, | ||||
試劑三 | 120 | 120 | 120 | 120 |
試劑四 | 90 | 90 | 90 | 90 |
混勻,室溫靜止30min。 | ||||
蒸餾水 | 90 | 90 | 90 | 90 |
充分混勻后,從上述反應(yīng)液中吸取200 µL于96孔板或微量玻璃比色皿中測(cè)定630nm處吸光值,記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A測(cè)定管和A對(duì)照管。計(jì)算?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管,?A測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管。 |
三、計(jì)算公式:
1、按樣本質(zhì)量計(jì)算:
尿素氮含量(μg/g)= ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V提取÷W
=25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W。
2.按蛋白濃度計(jì)算:
尿素氮含量(μg/mg prot)=ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V提取÷(Cpr×V提?。?/span>
=25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr。
3、按細(xì)胞數(shù)計(jì)算:
尿素氮含量(μg/104 cell)= ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V提取÷細(xì)胞數(shù)量
=25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量。
4、按液體體積計(jì)算:
尿素氮含量(μg/mL)=ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品
=25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)。
C標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品濃度,25μg/mL;V提?。禾崛∫后w積,1mL;W:樣品質(zhì)量,g;Cpr:樣品蛋白濃度,mg/mL;細(xì)胞數(shù)量:以萬計(jì)。
注意事項(xiàng):
1、配制好的試劑一在2-8℃條件下可保存一周。
2、ΔA測(cè)定大于1或者A測(cè)定管大于1時(shí),建議將樣品用蒸餾水稀釋后在進(jìn)行測(cè)定。
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