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供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 100管/48樣 |
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貨號 | BA1243-100 | 應用領域 | 化工,生物產業(yè) |
尿素氮(BUN)含量檢測試劑盒(微量法)
注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
產品規(guī)格:100管/48樣
產品簡介:
尿素(BUN)是人體蛋白質代謝的主要終末產物,BUN構成了血液中絕大部分的非蛋白質氮,血液尿素氮是腎功能的主要指標之一。用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產生的NH3-N,生成的藍色靛酚和尿素氮的濃度成正比。
產品內容:
試劑一:粉劑×2瓶,4℃避光保存,臨用前加2mL蒸餾水充分溶解。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑三A液:液體20mL×1支,4℃保存;
試劑三B液:液體20mL×1瓶,4℃保存;
將AB溶液保存在冰箱中。使用前將2溶液各20毫升混合,用蒸餾水稀釋至100毫升。
試劑四:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
標準品:粉劑×1瓶,4℃保存。10mg尿素。臨用前加入4.66mL蒸餾水配制成1mg/mL尿素氮標準液。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、天平、研缽/勻漿器、低溫離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
操作步驟:
一、樣品處理
1、組織:按照質量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5-10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL蒸餾水),冰上勻漿后于4℃,13000g離心15min,取上清待測。
2、細胞:按照細胞數量(104個):蒸餾水體積(mL)為500-1000:1的比例(建議500萬個細胞加入1mL蒸餾水),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3s,間隔7s,總時間3min);然后4℃,13000g離心15min,取上清置于冰上待測。
3、血清(漿)或其它液體:直接檢測。
二、測定操作:
1、分光光度計/酶標儀預熱30min,波長調至630nm,分光光度計蒸餾水調零。
2、將1mg/mL尿素氮標準液用蒸餾水稀釋至50μg/mL備用。
3、加樣表:
試劑名稱(μL) | 空白管 | 標準管 | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 30 | 30 | ||
標準品 | 30 | |||
蒸餾水 | 30 | 24 | ||
試劑一 | 60 | 60 | 60 | |
試劑二 | 110 | 110 | 110 | 110 |
充分混勻,于37℃反應10min, | ||||
試劑三 | 120 | 120 | 120 | 120 |
試劑四 | 90 | 90 | 90 | 90 |
混勻,室溫靜止30min。 | ||||
蒸餾水 | 90 | 90 | 90 | 90 |
充分混勻后,從上述反應液中吸取200 µL于96孔板或微量玻璃比色皿中測定630nm處吸光值,記為A空白管、A標準管、A測定管和A對照管。計算?A標準=A標準管-A空白管,?A測定=A測定管-A對照管。 |
三、計算公式:
1、按樣本質量計算:
尿素氮含量(μg/g)= ΔA測定÷ΔA標準×C標準品×V提取÷W
=25×ΔA測定÷ΔA標準÷W。
2.按蛋白濃度計算:
尿素氮含量(μg/mg prot)=ΔA測定÷ΔA標準×C標準品×V提取÷(Cpr×V提?。?/span>
=25×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr。
3、按細胞數計算:
尿素氮含量(μg/104 cell)= ΔA測定÷ΔA標準×C標準品×V提取÷細胞數量
=25×ΔA測定÷ΔA標準÷細胞數量。
4、按液體體積計算:
尿素氮含量(μg/mL)=ΔA測定÷ΔA標準×C標準品
=25×ΔA測定÷ΔA標準。
C標準品:標準品濃度,25μg/mL;V提?。禾崛∫后w積,1mL;W:樣品質量,g;Cpr:樣品蛋白濃度,mg/mL;細胞數量:以萬計。
注意事項:
1、配制好的試劑一在2-8℃條件下可保存一周。
2、ΔA測定大于1或者A測定管大于1時,建議將樣品用蒸餾水稀釋后在進行測定。
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