葡萄糖氧化酶（GOD）活性檢測(cè)試劑盒（微量法）

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1245

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動(dòng)物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產(chǎn)生H₂O₂，是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。

GOD催化葡萄糖產(chǎn)生H₂O₂，過氧化物酶在有氧存在時(shí)催化H₂O₂分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì)，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關(guān)系。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體3mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體1mL×1支，-20℃保存，融化后可分裝保存。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟：

一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備

1、組織處理：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）：直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至500nm，蒸餾水調(diào)零。

2、GOD工作液的配制：取15mL試劑一加3mL試劑二混勻（現(xiàn)配現(xiàn)用）。

3、加樣表：

樣品測(cè)定前將GOD工作液與試劑三放入37℃水浴中保溫，然后將上述試劑按順序加入微量比色皿/96孔板中，加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí)；在500 nm波長(zhǎng)下記錄20秒時(shí)的初始吸光度A1及1分20秒時(shí)的吸光度A2。計(jì)算?A=A2-A1。

三、GOD活力單位的計(jì)算

a.用微量玻璃比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、動(dòng)物組織 GOD 活力的計(jì)算

（1）按蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/mg prot）=?A÷(ε×d)×V反總÷(Cpr×V樣)÷T=1333×?A÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/g鮮重）=?A÷(ε×d)×V反總÷(W÷V提取×V樣)÷T=1333×?A÷W

2、血清（漿）GOD 活力的計(jì)算

單位的定義：每mL血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/mL）=?A÷(ε×d)×V反總÷T÷V樣本=1333×?A

V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣本：加入樣本體積，0.02mL；V提取，加入提取液體積，1mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；d：光徑，1cm；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺消光系數(shù)，7.5×10^-3mL/µmol/cm；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、動(dòng)物組織GOD活力的計(jì)算

（1）按蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/mg prot）=?A÷(ε×d)×V反總÷(Cpr×V樣)÷T=2222×?A÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/g 鮮重）=?A÷(ε×d)×V反總÷(W÷V提取×V樣)÷T=2222×?A÷W

2、血清（漿）GOD 活力的計(jì)算

單位的定義：每mL血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/mL）=?A÷(ε×d)×V反總÷T÷V樣本=2222×?A

V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣本：加入樣本體積，0.02mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；d：光徑，0.6cm；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺消光系數(shù)，7.5×10^-3mL/µmol/cm；T：反應(yīng)時(shí)間，1min

注意事項(xiàng)：

1、不同勻漿組織中GOD活力不一樣，做正式試驗(yàn)之前請(qǐng)做1-2只預(yù)試，若A2-A1>1, 則說明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當(dāng)濃度勻漿上清液，使A2-A1<1，以提高檢測(cè)靈敏度。

實(shí)驗(yàn)過程中若出現(xiàn)A1> A2現(xiàn)象請(qǐng)將樣本用提取液稀釋成適當(dāng)濃度.

2、最好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3、此試劑盒僅適用于動(dòng)物組織和動(dòng)物血清（漿）。