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BA1245-100
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上海市
更新時間:2021-11-22 16:44:20瀏覽次數(shù):161次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣 |
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貨號 | BA1245-100 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
葡萄糖氧化酶(GOD)活性檢測試劑盒(微量法)
注意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
產(chǎn)品貨號:BA1245
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
產(chǎn)品簡介:
GOD(EC 1.1.3.4)廣泛存在于動物和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并產(chǎn)生H2O2,是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。
GOD催化葡萄糖產(chǎn)生H2O2,過氧化物酶在有氧存在時催化H2O2分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì),顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關(guān)系。
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體3mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體1mL×1支,-20℃保存,融化后可分裝保存。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水
操作步驟:
一、樣品測定的準(zhǔn)備
1、組織處理:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿):直接檢測。
二、測定步驟
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至500nm,蒸餾水調(diào)零。
2、GOD工作液的配制:取15mL試劑一加3mL試劑二混勻(現(xiàn)配現(xiàn)用)。
3、加樣表:
試劑名稱(μL) | 測定管 |
GOD工作液 | 174 |
試劑三 | 6 |
混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min | |
樣本 | 120 |
樣品測定前將GOD工作液與試劑三放入37℃水浴中保溫,然后將上述試劑按順序加入微量比色皿/96孔板中,加樣本的同時開始計時;在500 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1及1分20秒時的吸光度A2。計算?A=A2-A1。
三、GOD活力單位的計算
a.用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下
1、動物組織 GOD 活力的計算
(1)按蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/mg prot)=?A÷(ε×d)×V反總÷(Cpr×V樣)÷T=1333×?A÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/g鮮重)=?A÷(ε×d)×V反總÷(W÷V提取×V樣)÷T=1333×?A÷W
2、血清(漿)GOD 活力的計算
單位的定義:每mL血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/mL)=?A÷(ε×d)×V反總÷T÷V樣本=1333×?A
V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣本:加入樣本體積,0.02mL;V提取,加入提取液體積,1mL;cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;d:光徑,1cm;ε:氧化型鄰聯(lián)茴香胺消光系數(shù),7.5×10-3mL/µmol/cm;T:反應(yīng)時間,1min。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、動物組織GOD活力的計算
(1)按蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/mg prot)=?A÷(ε×d)×V反總÷(Cpr×V樣)÷T=2222×?A÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/g 鮮重)=?A÷(ε×d)×V反總÷(W÷V提取×V樣)÷T=2222×?A÷W
2、血清(漿)GOD 活力的計算
單位的定義:每mL血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1µmol氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/mL)=?A÷(ε×d)×V反總÷T÷V樣本=2222×?A
V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣本:加入樣本體積,0.02mL;cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;d:光徑,0.6cm;ε:氧化型鄰聯(lián)茴香胺消光系數(shù),7.5×10-3mL/µmol/cm;T:反應(yīng)時間,1min
注意事項:
1、不同勻漿組織中GOD活力不一樣,做正式試驗之前請做1-2只預(yù)試,若A2-A1>1, 則說明組織活力太高,必須用提取液稀釋成適當(dāng)濃度勻漿上清液,使A2-A1<1,以提高檢測靈敏度。
實驗過程中若出現(xiàn)A1> A2現(xiàn)象請將樣本用提取液稀釋成適當(dāng)濃度.
2、最好兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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