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BA1246-50
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上海市
更新時間:2021-11-22 16:33:01瀏覽次數(shù):174次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50管/48樣 |
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貨號 | BA1246-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
注意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
產(chǎn)品貨號:BA1246
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
產(chǎn)品簡介:
葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動物而言,葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的一能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。
葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產(chǎn)生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在505nm有特征吸收峰。
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:0.5μmol/mL葡萄糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體25mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體25mL×1瓶,4℃保存;
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
操作步驟:
一、葡萄糖提取:
1、組織的處理:稱取約0.1g樣本,加入1mL蒸餾水研磨成勻漿,置沸水浴中煮沸10分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g,常溫離心10min,取上清液備用。
2、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個):蒸餾水體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL蒸餾水),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復(fù)30次),置沸水浴中煮沸10分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清液備用。
二、測定步驟:
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至505nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 在1.5mL離心管中依次加入下列試劑:
試劑名稱(μL) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
樣本 | 100 | ||
試劑一 | 100 | ||
蒸餾水 | 100 | ||
混合試劑 | 900 | 900 | 900 |
混勻,置37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴中,保溫15min,于505nm波長處讀取吸光度。
三、葡萄糖含量計(jì)算:
1、按蛋白濃度計(jì)算
葡萄糖含量(µmol/mg prot)=C ×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V樣÷(Cpr×V樣)
=0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
2、按樣本鮮重計(jì)算
葡萄糖含量(µmol/g 鮮重)=C ×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ×V樣÷(W÷V樣總×V樣)
=0.5 ×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷W
3、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
葡萄糖含量(µmol/104 cell)=C ×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ×V樣÷(500÷V樣總×V樣)
=0.001 ×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
C:葡萄糖溶液濃度,0.5µmol/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;V樣:加入的樣本體積,100µL=0.1mL;V樣總:樣本總體積,1mL;W:樣本鮮重,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量,500萬。
4、若A測定管大于1.5,稀釋后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
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