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葡萄糖脫氫酶(GCDH)檢測(cè)試劑盒

參  考  價(jià):面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)

    BA1248-50

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

更新時(shí)間:2021-11-22 16:03:44瀏覽次數(shù):172次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50管/48樣
貨號(hào) BA1248-50 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,主要存在于多種微生物和高等動(dòng)物的肝臟中。GCDH是一種制備高含量低聚果糖的理想用酶,同時(shí)也是臨床血糖測(cè)定的診斷用酶,可廣泛用于食品工業(yè)及醫(yī)藥工業(yè)領(lǐng)域中。

GCDH 催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,利用NADH在340 nm處吸光值的變化即可反映葡萄糖脫氫酶的活性。

葡萄糖脫氫酶(GCDH)活性檢測(cè)試劑盒(紫外分光光度法)

注意:正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

 

產(chǎn)品貨號(hào):BA1248

 

產(chǎn)品規(guī)格:50/48

                                        

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

GCDHEC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,主要存在于多種微生物和高等動(dòng)物的肝臟中。GCDH是一種制備高含量低聚果糖的理想用酶,同時(shí)也是臨床血糖測(cè)定的診斷用酶,可廣泛用于食品工業(yè)及醫(yī)藥工業(yè)領(lǐng)域中。

GCDH 催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,利用NADH340 nm處吸光值的變化即可反映葡萄糖脫氫酶的活性。

 

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體60 mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體50 mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入15mL試劑一溶解,用不完的試劑4℃保存。

試劑三:粉劑×2瓶,-20℃避光保存。臨用前每瓶加入5mL試劑一溶解,用不完的試劑建議分裝后-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。

 

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式低溫離心機(jī)、水浴鍋、1 mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、粗酶液提?。?/span>

組織:按照組織質(zhì)量(g)︰提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后,8000 g,4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測(cè)。

細(xì)胞或細(xì)菌:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè))︰提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌(功率20%200 W,超聲3s,間隔7s,總時(shí)間5min);然后8000g4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

血漿(清):直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340 nm,蒸餾水調(diào)零。

2、工作液的配制:按照試劑一︰試劑二︰試劑三為432的體積比例充分混勻,備用,用前37℃預(yù)熱10 min

3、 操作表:在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑:

試劑名稱(μL

空白管

測(cè)定管

工作液

900

900

樣本


100

蒸餾水

100


加入樣本即開始計(jì)時(shí),立即混勻,于340nm處測(cè)定10s時(shí)的吸光值A1,迅速置于37℃水浴或培養(yǎng)箱1min,拿出迅速擦干測(cè)定1min 10s 時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管。空白管只需做1-2次。

三、GCDH 酶活計(jì)算:

1)按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義:每毫克蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

GCDH 酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T=1607.7×ΔA÷Cpr

2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義:每克樣品每分鐘產(chǎn)生1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

GCDH 酶活(U/g 鮮重)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×W÷V樣總)÷T =1607.7×ΔA÷W

3)按細(xì)菌和細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義:每104個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

GCDH 酶活(U/104cell=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè)))÷T

=1607.7×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))

4)按液體體積計(jì)算

酶活定義:每mL樣本每分鐘產(chǎn)生1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

GCDH 酶活(U/mL=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷T=1607.7×ΔA

εNADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/ mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù), 1mol=109 nmol;V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mL;V樣總: 加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g,T:反應(yīng)時(shí)間:1min。

 

注意事項(xiàng):

1、樣本提取上清液置于冰上待測(cè),且樣本提取完成后建議當(dāng)天提取當(dāng)天內(nèi)測(cè)完。

2、當(dāng)A1A2大于1時(shí),建議將樣品用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

3、當(dāng)ΔA大于1時(shí),建議將樣品用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

 

 

 


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