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羥脯氨酸(HYP)含量檢測(cè)試劑盒(微量法)

參  考  價(jià):面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)

    BA1253-100

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

更新時(shí)間:2021-11-22 15:38:48瀏覽次數(shù):219次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100管/96樣
貨號(hào) BA1253-100 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

樣品經(jīng)酸水解產(chǎn)生游離的HYP,進(jìn)一步被氯胺T氧化,氧化產(chǎn)物與對(duì)二甲氨基甲醛反應(yīng),產(chǎn)生紅色化合物,在560nm處有特征吸收峰。通過測(cè)定樣品水解液560nm吸光值,可計(jì)算HYP含量。

羥脯氨酸(HYP)含量檢測(cè)試劑盒(微量法)

注意:正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

 

產(chǎn)品貨號(hào):BA1253

 

產(chǎn)品規(guī)格:100/96

                                        

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

樣品經(jīng)酸水解產(chǎn)生游離的HYP,進(jìn)一步被氯胺T氧化,氧化產(chǎn)物與對(duì)二甲氨基甲醛反應(yīng),產(chǎn)生紅色化合物,在560nm處有特征吸收峰。通過測(cè)定樣品水解液560nm吸光值,可計(jì)算HYP含量。

 

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:6mol/L鹽酸,自備。濃鹽酸:H2OV/V= 1:1,室溫保存。

試劑一:液體8mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體8mL×1瓶,4℃避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)品:液體0.5mL×1支,0.5mg/mL羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品,4℃保存。

 

需自備的儀器和用品:

天平、烘箱、玻璃管、離心機(jī)、水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、6mol/L鹽酸和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、羥脯氨酸提?。?/span>

1、組織:稱取約0.2g樣品于玻璃管,將組織盡量剪碎以便消化,蓋子稍松不密閉。加入2mL的提取液,煮沸或110℃烘箱26小時(shí)消化至沒有可見大的團(tuán)塊,16000rpm25℃,離心20min(若離心后仍有雜質(zhì),可通過過濾去除),用10mol/LNaOH(約1mL)調(diào)節(jié)pH值至68范圍內(nèi)。蒸餾水定容至4mL,取上清待測(cè)。(過程中可能有黑色物質(zhì)生成,若長時(shí)間不能消化,可能為碳化的物質(zhì))

2、細(xì)胞:取500萬個(gè)細(xì)胞,加入1mL的提取液,煮沸或110℃烘箱26小時(shí)消化至透明狀,16000rpm,25℃,離心20min,用10mol/LNaOH(約0.5mL)調(diào)節(jié)pH值至68范圍內(nèi)。蒸餾水定容至2mL,取上清待測(cè)。

二、測(cè)定步驟:

1、將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為3015、7.53.75、1.875、0.9380.469、0.234µg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至560nm,蒸餾水調(diào)零。

3、按下表進(jìn)行操作: 


空白管

測(cè)定管

標(biāo)準(zhǔn)管

樣品(μL


60


標(biāo)準(zhǔn)溶液(μL



60

試劑一(μL

60

60

60

混勻,室溫靜置20min

試劑二(μL

60

60

60

H2O(μL

180

120

120

混勻,60℃,20min水浴,取出后室溫靜置15min,取200µL于微量玻璃比色皿/96 孔板中檢測(cè) A560吸光值。ΔA=A測(cè)定管-A空白管

三、羥脯氨酸含量計(jì)算公式

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,?A標(biāo)準(zhǔn)(?A =A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到方程y=kx+b。將?A測(cè)定(?A =A測(cè)定管-A空白管)帶入方程得到x

2、羥脯氨酸含量的測(cè)定:

1)按樣本鮮重計(jì)算:

組織羥脯氨酸含量(µg/g鮮重)= x×V樣品÷W×V樣品÷V組提)=4x÷W

2)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

組織羥脯氨酸含量(µg/mg prot= x×V樣品÷Cpr×V樣品)=x÷Cpr

3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:

細(xì)胞羥脯氨酸含量(µg/104cell= x×V樣品÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣品÷V胞提)=2x÷細(xì)胞數(shù)量

V樣品:加入的樣品體積,0.06mLV組提:組織提取液體積,4mL;V胞提:細(xì)胞提取液體積,2mL;W:樣本鮮重,g;細(xì)胞數(shù)量:以104為單位,萬個(gè);Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL。

 

注意事項(xiàng):

1OD值大于1.0,樣品適當(dāng)稀釋再測(cè)定,注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。

2、試劑有一定的毒性,請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施,防止吸入或與皮膚接觸。

3、按樣本蛋白濃度計(jì)算時(shí),需單獨(dú)提取樣本中的蛋白質(zhì)并測(cè)定。

 

 

 

 


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