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BA1256-50
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更新時(shí)間:2021-11-22 15:01:49瀏覽次數(shù):171次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50管/48樣 |
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貨號(hào) | BA1256-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
漆酶活性檢測(cè)試劑盒(可見(jiàn)分光光度法)
注意:正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
漆酶(CE1.10.3.2)是一種含銅的多酚氧化酶,屬于銅藍(lán)氧化酶家族,漆酶存在菇、菌及植物中,是一種環(huán)保型酶,其*的催化性質(zhì)在生物檢測(cè)中有廣泛的應(yīng)用。
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基,在420nm處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS,測(cè)定ABTS自由基的增加速率,可計(jì)算得漆酶活性。
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×2瓶,4℃避光保存。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、天平、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水,水浴鍋。
操作步驟:
一、粗酶液提取:
(1)組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
(2)細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
(3)培養(yǎng)液:直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟:
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至420nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 水浴鍋溫度調(diào)至45℃。
3、 工作液的配制:一瓶試劑二用25mL試劑一溶解?,F(xiàn)用現(xiàn)配。
4、 操作表:在1mL玻璃比色皿中分別加入下列試劑:
樣本名稱 | 測(cè)定管 | 空白管 |
樣本(μL) | 150 | - |
蒸餾水(μL) | - | 150 |
工作液(μL) | 850 | 850 |
在1mL玻璃比色皿中分別加入上述試劑,充分混勻后于420nm處測(cè)定10s時(shí)的吸光值A1,迅速置于45℃水浴3min,拿出迅速擦干測(cè)定190s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算△A測(cè)定管= A2測(cè)定-A1測(cè)定,△A空白管=A2空白-A1空白,△A=△A測(cè)定管-△A空白管??瞻坠苤恍枳鲆淮?。 |
三、漆酶活計(jì)算:
(1)按蛋白濃度計(jì)算
酶活定義:每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶酶活(U/mg prot)=△A÷ε÷d×V反總×109÷(V樣×Cpr)÷T= 61.7×△A÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義:每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶酶活(U/g 鮮重)=△A÷ε÷d×V反總×109÷(V樣×W÷V樣總)÷T= 61.7×△A÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義:每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶酶活(U/104 cell)=△A÷ε÷d×V反總×109÷(V樣×500÷V樣總)÷T= 0.123×△A
(4)按液體體積計(jì)算
酶活定義:每mL液體每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶酶活(U/mL)=△A÷ε÷d×V反總×109÷V樣÷T= 61.7×△A
ε:ABTS 摩爾消光系數(shù):36000L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.001L;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.15mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度需自行測(cè)定;W,樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,3min。
注意事項(xiàng):
1、工作液需臨用前配制,并且盡快使用,4℃保存一周,若變色則不能使用。
2、測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),若吸光值較高,請(qǐng)將樣品用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔,正常情況下,OD值變化不超過(guò)0.05。
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