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漆酶活性檢測試劑盒 (可見分光光度法)

參  考  價:面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號

    BA1256-50

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

更新時間:2021-11-22 15:01:49瀏覽次數(shù):169次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50管/48樣
貨號 BA1256-50 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
漆酶活性檢測試劑盒(可見分光光度法)
漆酶(CE1.10.3.2)是一種含銅的多酚氧化酶,屬于銅藍氧化酶家族,漆酶存在菇、菌及植物中,是一種環(huán)保型酶,其*的催化性質(zhì)在生物檢測中有廣泛的應(yīng)用。

漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基,在420nm處的吸光系數(shù)遠大于底物ABTS,測定ABTS自由基的增加速率,可計算得漆酶活性。

漆酶活性檢測試劑盒(可見分光光度法)

注意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

產(chǎn)品貨號:BA1256

 

產(chǎn)品規(guī)格:50/48

 

產(chǎn)品簡介:

漆酶(CE1.10.3.2)是一種含銅的多酚氧化酶,屬于銅藍氧化酶家族,漆酶存在菇、菌及植物中,是一種環(huán)保型酶,其*的催化性質(zhì)在生物檢測中有廣泛的應(yīng)用。

漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基,在420nm處的吸光系數(shù)遠大于底物ABTS,測定ABTS自由基的增加速率,可計算得漆酶活性。

 

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:粉劑×2瓶,4℃避光保存。

 

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、低溫離心機、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、天平、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水,水浴鍋。

 

操作步驟:

一、粗酶液提?。?/span>

1)組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2)細胞:按照細胞數(shù)量(104 個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。

3)培養(yǎng)液:直接檢測。

二、測定步驟:

1、 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至420nm,蒸餾水調(diào)零。

2 水浴鍋溫度調(diào)至45℃。

3 工作液的配制:一瓶試劑二用25mL試劑一溶解?,F(xiàn)用現(xiàn)配。

4、 操作表:在1mL玻璃比色皿中分別加入下列試劑:

樣本名稱

測定管

空白管

樣本(μL

150

-

蒸餾水(μL

-

150

工作液(μL

850

850

1mL玻璃比色皿中分別加入上述試劑,充分混勻后于420nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于45℃水浴3min,拿出迅速擦干測定190s時的吸光值A2,計算△A測定管= A2測定-A1測定,△A空白管=A2空白-A1空白,△A=A測定管-A空白管??瞻坠苤恍枳鲆淮?。

三、漆酶活計算:

1)按蛋白濃度計算

酶活定義:每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。

漆酶酶活(U/mg prot=△A÷ε÷d×V反總×109÷V×Cpr÷T= 61.7×△A÷Cpr

2)按樣本質(zhì)量計算

酶活定義:每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。

漆酶酶活(U/g 鮮重)=△A÷ε÷d×V反總×109÷V×W÷V樣總)÷T= 61.7×△A÷W

3)按細胞數(shù)量計算

酶活定義:每104個細胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。

漆酶酶活(U/104 cell=△A÷ε÷d×V反總×109÷V×500÷V樣總)÷T= 0.123×△A

4)按液體體積計算

酶活定義:每mL液體每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。

漆酶酶活(U/mL=△A÷ε÷d×V反總×109÷V÷T= 61.7×△A

εABTS 摩爾消光系數(shù):36000L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.001L;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.15mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度需自行測定;W,樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時間,3min。

 

注意事項:

1、工作液需臨用前配制,并且盡快使用,4℃保存一周,若變色則不能使用。

2、測定之前進行預(yù)實驗,若吸光值較高,請將樣品用提取液進行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y定,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3、空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔,正常情況下,OD值變化不超過0.05。

 


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