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羧酸酯酶(CarE)活性檢測試劑盒

參  考  價:面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 型號

    BA1282-50

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

更新時間:2021-11-22 14:53:08瀏覽次數:171次

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供貨周期 現貨 規(guī)格 50管/48樣
貨號 BA1282-50 應用領域 化工,生物產業(yè)
羧酸酯酶(CarE)活性檢測試劑盒
哺乳動物CarE,也稱脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內源性與外源性物質水解,但不能催化水解乙酰膽堿及其類似物。CarE參與脂質運輸和代謝,并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關,有機磷農藥可結合并且抑制CarE活性。

羧酸酯酶(CarE)活性檢測試劑盒(可見分光光度法)

注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

產品貨號:BA1282

 

產品規(guī)格:50/48

 

產品簡介:

哺乳動物CarE,也稱脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內源性與外源性物質水解,但不能催化水解乙酰膽堿及其類似物。CarE參與脂質運輸和代謝,并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關,有機磷農藥可結合并且抑制CarE活性。

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固藍顯色;在450nm光吸收增加速率,計算CarE活性。

 

產品內容:

提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。用前用20mL無水乙醇充分溶解.

試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存。用前將全部試劑三倒入試劑二瓶中充分溶解。 

試劑三:液體30mL×1瓶,4℃保存。

 

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、粗酶液提?。?/span>

細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液,超聲波破碎細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次);然后15000rpm,4℃,離心30min,取上清置于冰上待檢。

組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進行冰浴勻漿。15000rpm,4℃,離心30min,取上清置于冰上待檢。

血清:直接測量。

二、測定步驟:

1、分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長至450nm,蒸餾水調零。

2、試劑二和試劑一置于37℃水浴中預熱30min以上。

3、在1mL玻璃比色皿中進行如下操作:

試劑名稱(μL

空白管

測定管

蒸餾水

15


上清液


15

試劑二

600

600

試劑一

360

360

迅速混勻后,測定第10s的吸光值記為A1空和A1測,反應3min,吹打混勻后立即測定190s的吸光值,記為A2空,A2測。注意:空白管只需做1~2次。計算△A空白管=A2-A1空,△A測定管=A2-A1測。

CarE 活性計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:37℃下,每mL反應體系每mg組織蛋白每分鐘催化吸光值增加 1 定義為一個酶活力單位。

CarE 酶活(U/mg prot)= (A測定管-A空白管)×V反總÷(Cpr×V)÷T

= 21.67×(A測定管-A空白管)÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:37℃下,每mL反應體系每g組織鮮重每分鐘催化吸光值增加1定義為一個酶活力單位。

CarE 酶活(U/g 鮮重)= (A測定管-A空白管) ×V反總÷(W÷V樣總×V 樣)÷T

=21.67×(A測定管-A空白管)÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:37℃下,每mL反應體系每1萬個細菌或細胞每分鐘催化吸光值增加1定義為一個酶活力單位。

CarE 酶活(U/10 4cell)= (A測定管-A空白管) ×V反總÷(200÷V細胞樣總×V樣)÷T

=0.044×(A測定管-A空白管)

4)按血清計算:

單位的定義:37℃下,每mL反應體系每mL血清每分鐘催化吸光值增加1定義為一個酶活力單位。

CarE 酶活(U/mL)= (A測定管-A空白管) ×V反總 ÷V血清÷T

=21.67×(A測定管-A空白管)。

V樣總:上清液總體積,1mL;V樣:加入樣本體積,0.015 ml;T:反應時間,3min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/ml;W:樣本質量,g200:細菌或細胞總數,200萬;V 細胞樣總:細胞中加入的試劑一體積,0.4mL;V血清:加入血清體積,0.4mL;V反總:反應體系總體積,0.975mL。

 

注意事項:

1、動物組織樣品一般稀釋10倍進行操作測定。

2、當吸光值大于1時,建議將樣品稀釋后測量。計算公式注意乘以稀釋倍數。

3、建議反應時保持37℃的環(huán)境,逐一比色,不建議用96孔板同時測很多樣品。

 


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