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BA1282-50
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上海市
更新時間:2021-11-22 14:53:08瀏覽次數(shù):169次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50管/48樣 |
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貨號 | BA1282-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
羧酸酯酶(CarE)活性檢測試劑盒(可見分光光度法)
注意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
產(chǎn)品簡介:
哺乳動物CarE,也稱脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解,但不能催化水解乙酰膽堿及其類似物。CarE參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代謝,并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關(guān),有機(jī)磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活性。
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固藍(lán)顯色;在450nm光吸收增加速率,計算CarE活性。
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。用前用20mL無水乙醇充分溶解.
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存。用前將全部試劑三倒入試劑二瓶中充分溶解。
試劑三:液體30mL×1瓶,4℃保存。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提?。?/span>
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);然后15000rpm,4℃,離心30min,取上清置于冰上待檢。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。15000rpm,4℃,離心30min,取上清置于冰上待檢。
血清:直接測量。
二、測定步驟:
1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm,蒸餾水調(diào)零。
2、試劑二和試劑一置于37℃水浴中預(yù)熱30min以上。
3、在1mL玻璃比色皿中進(jìn)行如下操作:
試劑名稱(μL) | 空白管 | 測定管 |
蒸餾水 | 15 | |
上清液 | 15 | |
試劑二 | 600 | 600 |
試劑一 | 360 | 360 |
迅速混勻后,測定第10s的吸光值記為A1空和A1測,反應(yīng)3min,吹打混勻后立即測定190s的吸光值,記為A2空,A2測。注意:空白管只需做1~2次。計算△A空白管=A2空-A1空,△A測定管=A2測-A1測。
CarE 活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:37℃下,每mL反應(yīng)體系每mg組織蛋白每分鐘催化吸光值增加 1 定義為一個酶活力單位。
CarE 酶活(U/mg prot)= (△A測定管-△A空白管)×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
= 21.67×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:37℃下,每mL反應(yīng)體系每g組織鮮重每分鐘催化吸光值增加1定義為一個酶活力單位。
CarE 酶活(U/g 鮮重)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷(W÷V樣總×V 樣)÷T
=21.67×(△A測定管-△A空白管)÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:37℃下,每mL反應(yīng)體系每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化吸光值增加1定義為一個酶活力單位。
CarE 酶活(U/10 4cell)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷(200÷V細(xì)胞樣總×V樣)÷T
=0.044×(△A測定管-△A空白管)
(4)按血清計算:
單位的定義:37℃下,每mL反應(yīng)體系每mL血清每分鐘催化吸光值增加1定義為一個酶活力單位。
CarE 酶活(U/mL)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總 ÷V血清÷T
=21.67×(△A測定管-△A空白管)。
V樣總:上清液總體積,1mL;V樣:加入樣本體積,0.015 ml;T:反應(yīng)時間,3min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;200:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),200萬;V 細(xì)胞樣總:細(xì)胞中加入的試劑一體積,0.4mL;V血清:加入血清體積,0.4mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.975mL。
注意事項:
1、動物組織樣品一般稀釋10倍進(jìn)行操作測定。
2、當(dāng)吸光值大于1時,建議將樣品稀釋后測量。計算公式注意乘以稀釋倍數(shù)。
3、建議反應(yīng)時保持37℃的環(huán)境,逐一比色,不建議用96孔板同時測很多樣品。
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