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BA1279-100
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上海市
更新時(shí)間:2021-11-19 17:17:06瀏覽次數(shù):196次
聯(lián)系我時(shí),請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/48樣 |
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貨號 | BA1279-100 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
酸性木聚糖酶(ACX)活性檢測試劑盒(微量法)
注意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
產(chǎn)品貨號:BA1279
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
產(chǎn)品簡介:
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生,能催化水解木聚糖,也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶,可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖,降低釀造中物料的粘度,促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放,以及降低飼料中的非淀粉多糖,促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用,因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中,酸性木聚糖酶(ACX)一般分離自耐酸的真菌,細(xì)菌及部分霉菌。
ACX在酸性環(huán)境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,進(jìn)一步在沸水浴條件下與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng),在540nm處有特征吸收峰,反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率,可計(jì)算ACX活力。
產(chǎn)品內(nèi)容:
緩沖液:液體60mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體7mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體4mL×1瓶,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1支,4℃保存。10mg木糖,臨用前加入667µL蒸餾水溶解,得到100µmol/mL木糖溶液,蒸餾水稀釋50倍得到2µmol/mL木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。
需自備的儀器和用品:
天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋,可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板和蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提取
1、發(fā)酵液:發(fā)酵液于8000rpm,4℃,離心15min,取上清,作為待測樣品。
2、酶干粉:稱約1mg,加1mL緩沖液溶解,蒸餾水稀釋10倍待測。
3、組織樣品:稱約0.1g組織,加入1mL緩沖液,冰上充分研磨。8000rpm,4℃,離心15min,取上清蒸餾水稀釋 10倍待測。
二、測定步驟
1、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定(在EP管中加入下列試劑)
試劑名稱(μL) | 對照管 | 測定管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
樣品 | 60 | 60 | ||
2µmol/mL木糖標(biāo)準(zhǔn)品 | 60 | |||
蒸餾水 | 60 | |||
緩沖液 | 90 | 90 | 90 | 90 |
試劑一 | 60 | 60 | 60 | |
混勻,50℃水浴中反應(yīng)30min,立即沸水浴中10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開,以免進(jìn)水,改變了反應(yīng)體系) | ||||
試劑一 | 60 | |||
試劑二 | 90 | 90 | 90 | 90 |
試劑三 | 30 | 30 | 30 | 30 |
混勻,沸水浴中顯色5min(注意不要讓蓋子爆開,以免進(jìn)水改變了反應(yīng)體系),冷卻后吸取200µL至96孔板或比色皿中,盡快測定各管540nm下的吸光度,分別記為A測定、A對照、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白。 |
三、ACX 活性計(jì)算:
1、發(fā)酵液ACX活力計(jì)算:
酶活定義:50℃,pH4.8條件下,每毫升發(fā)酵液每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1µmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力(U/mL)=C標(biāo)準(zhǔn)×(A測定-A對照)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷T
=0.067×(A測定-A對照)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)
C標(biāo)準(zhǔn):木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,2µmoL/mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30min。
2、酶干粉ACX活力計(jì)算:
酶活定義:50℃,pH4.8條件下,每毫克酶每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1µmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX 活力(U/mg)= 10×C標(biāo)準(zhǔn)×(A測定-A對照)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×V提取÷W1÷T
=0.67×(A測定-A對照)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W1
10:樣本稀釋倍數(shù),10倍;C標(biāo)準(zhǔn):木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,2µmoL/mL;V提?。杭尤刖彌_液體積,1mL;W1:酶干粉重量,mg;T:反應(yīng)時(shí)間,30min。
3、組織中ACX活力計(jì)算:
(1)按樣品蛋白濃度計(jì)算:
酶活定義:50℃,pH 4.8條件下,每mg組織蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1µmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX 活力(U/mg prot)= 10×C標(biāo)準(zhǔn)×(A測定-A對照)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×V樣品÷(V樣品×Cpr)÷T
=0.67×(A測定-A對照)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷Cpr
(2)按樣品鮮重計(jì)算:
酶活定義:50℃,pH4.8條件下,每克組織每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1µmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX 活力(U/g 鮮重)= 10×C標(biāo)準(zhǔn)×(A測定-A對照)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×V提取÷W2÷T
=0.67×(A測定-A對照)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W2
10:樣本稀釋倍數(shù),10倍;C標(biāo)準(zhǔn):木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,2µmoL/mL;V提?。杭尤刖彌_液體積,1mL;W2:樣本鮮重,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min;Cpr:樣品蛋白濃度,mg/mL;V樣品:加入的樣品體積,0.06mL。
注意事項(xiàng):
吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~1.5之間,否則加大樣品量或稀釋樣品,注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。
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