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當(dāng)前位置:上海尚寶生物科技有限公司>>試劑盒>>生化試劑盒>> BA1717-50維生素B2檢測試劑盒(熒光光度法)
BA1717-50
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上海市
更新時間:2021-11-19 16:47:19瀏覽次數(shù):211次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號 | BA1717-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
維生素B2檢測試劑盒(熒光光度法)
產(chǎn)品貨號:BA1717
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品簡介:
維生素B2 (Vitamin B2 )又稱核黃素,是一種異咯嗪衍生物,耐熱、微溶于水,中性水溶液及乙醇溶液呈黃色,具有很強的熒光,在pH6~7的溶液中熒光*,在pH=11時熒光消失。核黃素可被還原性物質(zhì)還原為無色的二氫化物,同時失去熒光,二氫化物在空氣中易重新氧化,恢復(fù)其熒光。
尚寶維生素B2檢測試劑盒(熒光光度法)是利用Vitamin B2水溶液在激發(fā)波長440~500nm(多為460nm),發(fā)射波長范圍約為510~550nm(多為520nm),當(dāng)加入有還原性的亞硫酸鹽時,核黃素被還原為無熒光的物質(zhì),根據(jù)稀核黃素溶液熒光強度的變化即可定量檢測Vitamin B2的含量。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
產(chǎn)品名稱 | 50T | 保存條件 |
試劑(A):Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml) | 2ml | 4℃,避光 |
試劑(B):組織勻漿液(10×) | 250ml | 室溫 |
試劑(C):亞硫酸鹽 | 4×100mg | 室溫 |
自備材料:
1. 待測樣品如青菜、水果、牛奶等
2. 蒸餾水
3. 勻漿器
4. 稀鹽酸或稀氫氧化鈉
5. 離心管或試管
6. 熒光光度計
操作步驟 (僅供參考) :
1. 稀釋組織勻漿液:取適量的組織勻漿液(10×),按組織勻漿液(10×):蒸餾水=1:9的比例稀釋,獲得1×組織勻漿液,待用。
2. 樣品準(zhǔn)備:
A)固體樣品:取待測材料如青菜、水果、松針等,清洗擦干,準(zhǔn)確稱量5g置于研磨器內(nèi)研磨,加入少量1×組織勻漿液,研磨碎,留取上清,再次用1×組織勻漿液研磨,最后一并倒入50ml離心管,補充1×組織勻漿液至50ml,用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4.5(如無條件可用pH試紙粗略測定),充分混勻后4000g離心5min或者過濾,上清或濾液定容至50ml,濾液4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
B)液體樣品:牛奶、飲料等液體樣品,取10ml牛奶于100ml燒杯中,加入0.1mol/L的稀鹽酸50ml,放入滅菌鍋中處理30min,冷卻后用稀氫氧化鈉調(diào)pH至6,再用稀鹽酸調(diào)pH至4.5,沉淀雜質(zhì),過濾后將濾液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中定容,濾液4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
3. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品:取適量的Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml),按Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml):1×組織勻漿液=1:9稀釋成Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(10μg/ml),4℃保存。注意:Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)需要充分溶解混勻,否則會導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)值不準(zhǔn)確。
4. 制備亞硫酸鹽工作液:取一支亞硫酸鹽100mg粉末,充分溶解于2ml蒸餾水,即配制成50mg/ml的亞硫酸鹽工作液,即配即用。
5. Vitamin B2檢測:選用恰當(dāng)?shù)臑V色片,測定的激發(fā)波長為460nm,發(fā)射波長為520nm。提前預(yù)熱儀器30min,蒸餾水調(diào)零,以下表6號管的Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(2.5μg/ml)作為參比溶液調(diào)熒光光度計的熒光強度讀數(shù)滿刻度(100%),分別測定其他標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測樣品的相對熒光強度,如果熒光強度大于100%,需要稀釋后再行測定。分別測定加入亞硫酸鹽工作液前后的熒光值,記為F0和FT 。加入亞硫酸鹽后,應(yīng)充分混勻,及時檢測。
Vitamin B 2 檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及待測樣品操作表
加入物 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 樣品 |
Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)(10μg/ml) | 0.125 | 0.25 | 0.5 | 0.75 | 1.0 | 1.25 | - |
蒸餾水 | 4.875 | 4.75 | 4.5 | 4.25 | 4.0 | 3.75 | - |
待測上清或濾液(ml) | - | - | - | - | - | - | 5.0 |
濃度(μg/ml) | 0.25 | 0.5 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 2.5 | - |
含量(μg) | 1.25 | 2.5 | 5 | 7.5 | 10 | 12.5 | |
還原前熒光值F0 | |||||||
亞硫酸鹽工作液 | 0.11 | 0.11 | 0.11 | 0.11 | 0.11 | 0.11 | 0.11 |
還原后熒光值FT |
計算:
溶液的熒光強度校準(zhǔn)值:F= F0 -FT
式中:F=校正后的熒光強度
F0=還原前熒光強度
FT=還原后熒光強度
以各管Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)的濃度(μg/ml)或含量(μg)為橫坐標(biāo),以對應(yīng)的校正后的熒光強度(F)為縱坐標(biāo),做出Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)曲線。
根據(jù) Vitamin B2標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品管的校正后的熒光強度 (F)即可計算出待測樣品中Vitamin B2的實際濃度和含量。
100ml液體樣品中VitaminB2含量(μg/100ml)= C×V2 ×100/V1
100g固體樣品中Vitamin B2含量(μg/100g)=C×V3 ×100/m
式中:C=待測樣品中Vitamin B2的濃度(μg/ml)
V1 =檢測體系中加入的濾液體積(ml)=5
V2 =液體樣本濾液的總體積(ml)=100
V3 =固體樣品的上清液總體積(ml)=50
m=固體樣品的質(zhì)量(g)=5
注意事項:
1. 在上述操作中,要嚴(yán)格避免VitaminB2受到陽光直射,否則易分解。
2. 待測樣品如不能及時測定,應(yīng)置于2~8℃避光保存,3天內(nèi)穩(wěn)定。
3. 含核黃素的標(biāo)準(zhǔn)品或樣品一旦加入亞硫酸鹽后會因產(chǎn)生二氫化物失去熒光,但二氫化物在空氣中又易重新氧化,恢復(fù)熒光,因此應(yīng)在10min內(nèi)檢測完畢,而且越快越好。
4. 如果樣品濃度過高,應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
有效期:6個月有效。4℃運輸,4℃保存。
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